脂多糖对幼年哮喘大鼠Toll样受体4及气道炎症的作用.pdf

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1、2014年l0月第36卷第20期HebeiMedicalJoumal，2014，Vol36OctNo．20doi：10．3969／j．issn．1002—7386．2014．20．007·论著·脂多糖对幼年哮喘大鼠Toll样受体4及气道炎症的作用玛力i亚荨【摘要】目的探讨不同浓度脂多糖对哮喘大鼠肺组织Toll样受体4表达及气道炎症的影响。方法使用清洁级sD大鼠50只，随机分为对照组(A)、哮喘组(B)、地塞米松组(C)低剂量LPS组(D1)及高剂量LPS组(D2)五组，对哮喘大鼠肺组织的病理变化、炎症细

2、胞改变、OVA—sIgE含量的影响、肺组织TLR4mRNA表达及EOS凋亡的影响进行分析。结果肺组织的病理变化：A组肺间质视野清晰，肺组织形态良好，可见肺泡管、小支气管，未见明显炎症细胞浸润。B组肺间质及肺泡腔内、支气管及血管周围大量炎症细胞浸润，支气管黏膜下水肿，黏膜皱褶增多，粘液腺增生。与B组比较，C组和D2组上述现象明显减轻，Dl组无明显变化。BALF中细胞总数、EOS计数及EOS百分比B组均明显高于A组(P<0．01)；C组和D2组均明显低于B组(P<0．叭)；D1组与B组差异均无统计学意义(P

3、>0．05)。OVA—slgE含量：c组、D2组与A相比有明显差异(P<0．01)，但较B组有明显降低(P<0．01)。D1组与B组比较差异无统计学意义(P>0．05)。TLR4mRNA表达能力：A组与B组差异无统计学意义(P>0．05)；C组、Dl组、D2组均明显高于B组(P<0．01)；D1组明显低于D2组(P<0．01)。EOS凋亡率：B组和D1组有少许核深染为棕褐色的凋亡细胞。A组、C组、D2纽较B纽增多(P<0．05或P<0．01)。结论高剂量脂多糖能降低血清中OVA—sIgE水平，上调TLR

4、4表达，诱导哮喘大鼠肺组织EOS凋亡；低剂量脂多糖虽激活TLR4信号通路，却不能缓解哮喘的气道炎症。【关键词】Toll受体；哮喘；脂多糖；地塞米松；细胞凋亡【中图分类号】R562．25【文献标识码】A【文章编号】1002—7386(2014)20—3068—03支气管哮喘简称哮喘，是严重威胁公共健康的慢OVA进行致敏与激发。c组：待腹腔注射1ml含性肺部炎症性疾病。因环境因素对其发病起着重要的100g地塞米松1h后在致敏和激发。D1组、D2组在作用，故Strachan提出了卫生假说。Toll样受体(To

5、ll致敏阶段每隔2d予以1ml含0．1g、100gE．coillikereceptor，TLR)的发现为卫生假说提供了理论依LPS腹腔注射，激发阶段待每次予以相同剂量浓度E．据。TLR4主要识别革兰阴性菌的脂多糖(1ipopolysae—coilLPS腹腔注射1h后在进行激发。charide，LPS)成分，参与调节Th0细胞向Thl或Th21．2．1．2样品的留取与保存：末次激发后1d，腹腔细胞增殖分化J。其中Th1应答对哮喘有保护作用，注射麻醉采用10％水合氯醛溶液400mg／kg，打开腹Th2能促进

6、哮喘气道变态反应性炎症的形成。本课题腔，腹主动脉取血，离心10min，3000r／min，吸取血针对不同浓度脂多糖对哮喘大鼠肺组织Toll样受体4清，一80℃储存备用。胸腔打开，肺组织分离，左主支表达及气道炎症的影响进行研究。气管结扎，右肺经气管行灌洗，分4次注入10ml0．9％1材料与方法氯化钠溶液，轻轻按摩肺组织，30s后回收灌洗液，回1．1实验动物清洁级雄性健康SD大鼠50只，体收率超过80％，然后离心10min，3000r／min，取上清重130～150g；4—6周龄，由安徽医科大学动物中心一8

7、0％储存备用。细胞沉淀用于细胞总数与分类计提供。随机将其分为对照组(A)、哮喘组(B)、地塞米数。左肺近肺门组织切取，4％多聚甲醛固定，原位杂松组(C)低剂量LPS组(D1)及高剂量LPS组(D2)共交标本固定2～3h，HE染色和细胞凋亡检测标本固5组，每组l0只。定5—6h后，转入70％乙醇，常规石蜡包埋切片。1．2实验方法1．2．2试验方法：通过光镜观察肺组织病理变化及支1．2．1SD大鼠哮喘模型建立、样品的留取与保存气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolarlavagefluid，BALF)1

8、．2．1．1动物模型的复制：B组大鼠第1、第8天予以中嗜酸l生粒细胞(Eosinophils，EOS)计数，酶联免疫吸OVA／AI(OH)3混合液1ml[含A1(OH)100mg和附试验、原位杂交法及末端脱氧核苷酰基转移酶介导OVA1mg]腹腔注射致敏，第15天予以1％OVA雾化性dUTP切口末端标记法(Terminaldeoxynucleotidyl激发30rain，持续3d。A组以0．9％氯化钠溶液代替transferase—media