转天蚕素AD（CAD）基因于紫花苜蓿的研究.pdf

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1、第33卷第4期华南农业大学学报Vo1_33．No．42012年l0月JournalofSouthChinaAculturalUniversityOct．2012转天蚕素AD(CAD)基因于紫花苜蓿的研究刘秀明1,2,3，朱海林。，杜淑环，万秋。，李海燕，李校垄(1吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心，吉林长春130118；2温州医学院，浙江温州325035；3吉林农业大学生命科学学院，吉林长春130118)摘要：为了探索利用紫花苜蓿Medicagosativa作为生物反应器生产杂合抗菌肽天蚕素AD(

2、CecropinAD，CAD)的可行性，通过PCR搭桥方法合成了CAD全长基因，并插入对外源基因表达有一定促进作用的调控元件：Q序列、Kozak序列及KDEL四肽序列，然后将改造后的CAD基因克隆进载体pcAMBIA1390R，构建了pcAMBIA139OR—CAD植物表达载体．将重组质粒转入根癌农杆菌AgrobacteriumtumefacienLBA4404，并通过农杆菌介导方法将CAD基因转化人紫花苜蓿．在含潮霉素(20mg／L)的筛选培养基上筛选转基因植株，通过PCR、Southernblotting检测

3、，CAD基因已经转入紫花苜蓿中；提取蛋白质进行抑菌活性研究，结果表明转基因苜蓿蛋白提取物对沙门氏菌Sal—monella及金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus具有一定抑菌活性．关键词：紫花苜蓿；抗菌肽；天蚕素AD；转基因中图分类号：Q786文献标志码：A文章编号：1001—411X(2012)04—0498—05ExpressionsofCecropinAD(CAD)inTransgenicAlfalfaLIUXiu—ming'，，ZHUHai—lin'，DuShu．huan，，WANQiu，，

4、LIHai．yan，，LIXiao—kun'(1MinistryofEducationEngineeringResearchCenterofBioreactorandPharmaceuticalDevelopment，JilinAgnculturalUniversity，Changchun130118，China；2WenzhouMedicinalCollege，Wenzhou325035，China；3CollegeofLifeSciences，JilinAgriculturalUniversity，Chang

5、chun130118，China)Abstract：ToexplorethepossibilityofexpressingthehybridpeptideCADinthealfalfa，Medicagosativa，thecDNAsequenceencodingCADwasobtainedbyrecursivePCR(rPCR)，andfusedwithelementssuchasQsequence．KozaksequenceandKDELsequencetoimprovetheexpressionlevelin

6、thetransgenicplants，andclonedintotheplanttransformationvectorpCAMBIA1390R．ThisrecombinantplasmidwastransformedintoAgrobacteriumtumefacienLBA4404andCADgenewastransformedintoalfalfabyA．tumefacien—mediatedmethod．Theregeneratedalfalfaplantswereselectedonmedium20m

7、g／Lhygro—myein．TheresultsofPCRandSouthernblottingshowedthattheCADgenewassuccessfullyinsertedintoalfalfagenome．ProteinsextractedfromtransgenicalfalfashowedacertainbacteriostaticactivitytoSalmo—nellaand彻hylococcusaureus．Keywords：Medicagosativa；antibacterialpept

8、ide；cecropinAD；transgenic抗生素的发现和应用挽救了许多被致病菌感染药株日益增多，从而使许多抗生素逐渐失去l临床应的人，然而，随着传统抗生素的广泛使用导致临床耐用的价值．因此，寻找新一代的抗菌药已成为现时一收稿日期：2011—12—27作者简介：刘秀明(198l一)女，实验师，博士研究生；通信作者：李海燕(1971一)女，教授，E-mail：hyli