转碱蓬脱水素基因烟草的鉴定和功能分析.pdf

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1、／家读义嗦乂４巧女＃隹俗ｉ；■‘转碱蓬脱水素基因烟草的鉴定和功能分析研究生：孙樣指导教师：马慧副教授专业名称：物学：细胸斗研究方向：细胞分子生物学＇？所在学院＂：生物科学技术学院＼，‘＇■■■．－、＊，＇．．．＊■，２０１６年６月ｒｔ’ＤｉｓｓｅａｔｉｏｎｆｏｒＭａｓｋｒｓｄｅｒｅｅｇＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｔｏｂａｃｃｏｏｆＳｕａｅｄａｓ

2、ａｌｓａＤｅｈｙｄｒｉｎＧｅｎｅＣａｎｄｉｄａｔｅ：ＳｕｎＭｅｎｇＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ａｓｓｏ．Ｐｒｏｆ．ＨｕｉＭａＳｐｅｃｉａｌｉｔｙ：ＣｅｌｌｕａｒＢｉｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈＦｉｅｌｄ：ＭｏｌｅｃｕｌａｒｅｘｏｂｉｏｌｏｇｙＣｏｌｌｅｇｅ：ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＳｈｅｎａｎｇＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｇｙＪｕｎｅ２０１６独创性声明本人卢明所吊交的论文是我个人在导师指导下进巧的硏究作及取得的硏究成果，

3、。尽巧所知レ：除了文中特别加ｕ乐注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得沈ｍ农业人巧诚其它教育机构的学位或证书而使ＭＬ一］Ｊ过的材料。ｊ我同；作的同忠对本研究所做的任何贡献均已化论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名时间；０亦／娘＇导师签名：Ｉ％■时间；＞／年知／／日关于论文知识产权和使用授权的说明本论文的知识产权为沈阳化业乂学所有。本人完全了解沈阿Ｉ农业人学巧关保留、使Ｗ学化论文的规定，即：巧校巧权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被巧阅和巧阅，可Ｗ采Ｗ影印、缩印

4、诚扫描巧复制手段保存、汇编学位论文。同意沈阳农业人巧可ＷＷ不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的内巧。巧份论文中的所巧内巧不经沈间（农业人学授权不得Ｗ任何方式擅白对外发表。（保密的学位论文在解密后应遵守此协议）：时间：年／研究生签名（月之曰才衫睽＾导师签名：时间：〇年／月曰＞、（沈巧Ｉ农业乂学硕＋巧位论文目录ｍ＾１Ａｂｓｔｒａｃｔ２第一章文献综述４１．１碱蓬概述４１．２脱水素概述５１．２．１脱水素的结构和类型５１．２．２脱水素的分布与表达６１．２．３脱水素的功能

5、６１．３功能研究方法９１１．３．基因水平研究方法９１．ＲＮＡ水．３２平研究方法１１１．３．２蛋白质水平研究方法１２１．４本研究意义１３二第章转脱水素基因烟草在分子水平上的鉴定１５１２．１试验材料与试剂５２丄１试验材料１５２丄２试验试剂１５２丄３试验仪器及设备１８２．２试验方法１８２．１．２转基因烟草的种植１８２２．２阳性菌株质粒的提取１９．２．２．３ＰＣＲ筛选阳性转基因植株２０２４ｏｕｔｈｅｏｔ．２．Ｓｒｎｂｌ验证２１２．３结果与分析２５２

6、１．３．阳性质粒的提取及鉴定２５２．３ＰＣＲ筛选阳性转基．２因植株２６２７２．３．３Ｓｏｕｔｈｅｍｂｌｏｔ验证２．４２９２．５结论３０第Ｈ章转脱水素基因烟草在蛋白表达水平上的鉴定３１３１．１试验材料与试剂３３１３丄１试验材料３丄２试验试剂３１１０＾＿３丄３试验仪器及设备３４３．２试验；３４３．２．１转基因烟草总蛋白提取３４３２．２．蛋白质定量３４３８ｂ－ｓＤ．２．３ｐＥＴ２ＳＨＮ在大肠杆菌中的诱导表达３５３ＤＳ－ＰＡＧＥ．２．４聚丙婦醜氨凝胶电

7、泳（Ｓ）３５３．２．５Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ验证３６．３３结果与分析巧３．３．１蛋白质定量结果３７３ＤＳ－．３．２ＳＰＡＧＥ电泳图３８３．３．３Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ图３９３．４舰３９３４０．５结论第四章转基因烟草抗逆生理功能分析４１４．１试验材料与试剂４１４丄１试验材料４１４丄２试验试齐［４１］４．２．３试验仪器及设各４２４．２试验方法４３４．２．１材料的处理４３４．２．２相对电导率的测定４３４．２．３丙二醒含量的测定４３４．

8、２．４超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性的测定４４４５．２．５游离脯氨酸含量的测定４４２．６４６．数据分析４．