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《应用PCR-反向斑点杂交快速鉴定分枝杆菌菌种.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、应用PCR-反I，」斑点杂交快速鉴定分枝杆菌菌种［摘要］目的:应用聚合酶链反应-反向斑点杂交法(PCR-RDBHA)快速鉴定分枝杆菌至种的水平。方法：以分枝杆菌rpoP基因编码序列为靶基因，应用PCR-RDBHA检测126株分枝杆茜临床分离株。以PCR-DNA测序为对照，对经PCR-RDBHA鉴定为非结核分枝杆菌(XTM)的临床分离株进行PCR-DNA测序。结果：126株临床分高株中,经鉴定115株(91.3%)为结核分枝杆菌复合群(MTC),H株(8.7%)为NTMSTM中,4株胞内分枝杆菌，1株堪萨斯分枝杆菌，1株戈登分枝杆菌
2、,2株痕疡分枝杆菌,3株脓肿分枝杆菌。11株NTMPCR-RDBHA与PCR-DNA测序结果一致。结论:PCR-RDBHA能鉴定分枝杆菌临床分离株至种的水平，方法简便、快速，结果准确，具有良好的临床应用价值。［关键词］分枝杆菌;菌种鉴定；聚合酶链反应；反向斑点杂交［中图分类号］R378.91E文献标识码］A［文章编号］1673-7210(2010)03(c)-035-02PCR-reversedotblothybridizationassayforrapididentificationofMycobacteriumspeciesZ
3、HANGXiaojuan(ThoraxDiseaseHospitalofShenyang,Shenyang110044,China)［Abstract］Objective:ToidentifyMycobacteriumspeciesrapidlybypolymerasechainreaction-reversedotblothybridizationassay(PCR-RDBHA).Methods:126mycobacterialclinicalisolatesweredetectedbyPCR-RDBHAbasedonthese
4、quenceofrpoPgene.PCR-DNAsequencingofthenontuberculousmycobacteria(NTM)identifiedbyPCR-RDBHAwasperformedascontrol.Results:Among126isolates,115(91.3%)weredeterminedtobeM.tuberculosiscomplex(MTC),11(8.7%)tobeNTMwhichcontained4M.intracellulare,1M.kansasii,1M.gordonae,2M.s
5、crofulaceumand3M.abscessus.Theresultsof11NTMidentifiedbyPCR-RDBHAwereinagreementwithPCR-DNAsequencing.Conclusion:Itissimple,rapid,accurateandvaluableinclinicalapplicationthatPCR-RDBHAisappliedtoidentifymycobacterialclinicalisolatestospecieslevel.［Keywords］Mycobacteriu
6、m;Speciesidentification;Polymerasechainreaction;Reversedotblothybridizationassay目前，常规的分枝杆菌菌种鉴定需采用分枝杆菌培养物进行生长特性试验(生长速度、生长温度、光产色试验、多种鉴别培养基上生长试验)及生化特性试验(耐热触酶试验、硝酸盐还原试验、烟酸试验、吐温-80水解试验、尿素酶水解试验、芳香硫酸酯酶试验、铁离了吸收试验、亚硝酸盐还原试验)等10余项试验，综合分析判定结果［1］,方法复杂、费时,慢生长分枝杆菌需3〜4周方可获得结果,且准确度较差，
7、难以满足临床诊断和治疗的需要.木实验以分枝杆菌rpoP基因为靶基因序列，应用聚合酶链反应-反的斑点杂交法(PCR-RDBHA)快速鉴定分枝杆菌临床分离株至种的水平，结果报道如下：1材料与方法1.1材料1.1.1分枝杆菌分离株经抗酸染色涂片检测阳性的分枝杆菌临床分离株126株,来自我院结核科和解放军第三九医院。1.1.2引物及探针引物I和II及21种分枝杆菌寡核昔酸探针序列参照文献［2］由上海生工生物工程有限公司合成。引物I和II扩增360bpDNA片段。分枝杆菌属、结核分枝杆菌复合群、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、脓肿
8、分枝杆菌、瘗疡分枝杆菌、胃分枝杆菌、偶然分枝杆菌、龟分枝杆菌、海分枝杆菌、猿猴分枝杆菌、戈登分枝杆菌、苏加分枝杆菌、马尔摩分枝杆菌、蟾蛉分枝杆菌、微黄分枝杆菌、土地分枝杆菌、耻垢分枝杆菌、不产色分枝杆菌和草分枝杆菌菌种对应的探针分别命名为pMyc、
