过表达prohibitin促进NB4-R1急性早幼粒细胞白血病维甲酸耐药细胞凋亡.pdf

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1、细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno1)2014，30(9933·论著·文章编号：1007—8738(2014)09—0933—04过表达prohibitin促进NB4-R1急性早幼粒细胞白血病维甲酸耐药细胞凋亡刘雁峰，贺鹏程，刘锋，程小岩，张梅(西安交通大学医学院第一附属医院血液内科，陕西西安710061)[摘要]目的构建人prohibitin基因真核过表达载体，拐a寸E调prohibitin对NIM．R1急性早幼粒细胞白血病维甲酸耐药细胞凋亡的影响。方法PCR钓取目的基因prohibitin，与pEGFP-N1-3FLAG真核载体定向

2、连接，PCR筛选阳性克隆，测序鉴定。将阳性重组载体pEGFP-N1-3FLAG-prohibitin转染NIM-R1细胞，以实时定量PCR(qRT—PER)和Westernblot法检测过表达效果，a．ri／iexinV-FITC／PI染色结合流式细胞术检~1]prohibitin过表达对NB4．R1细胞凋亡的影响。结果PCR筛选及测序比对，证明成功构建了prohibitin基因过表达载体；对NB4-R1细胞转染率可达70％以上；qRT．PCR结果显示转染pEGFP—N1-3FLAG．prohibitin过表达载体组(OE)prohibitinmRNA表达水平

3、较空白对照组(CON)和阴性对照组(NC)分别上调(1．644-0．37)倍和(1．584-0．43)倍(P<0．05)，Westernblot结果显示OE组prohibitin蛋白表达水平较CON组和NC组分别上调(1．91±0．33)倍和(1．99±0．37)倍(P<0．05)；流式细胞术结果表明CON组、NC组和OE组NIMR1细胞凋亡率分别为(5．88±0．43)％、(6．63±0．46)％和(28．22．i-1．33)％，OE组较CON组和NC组细胞凋亡率分别增加了(3．80±0．24)倍和(3．39±0．30)倍(P<0．05)。结论过表达proh

4、ibitin可诱导NB4-R1细胞凋亡。[关键词]prohibitin；过表达；NIM-R1细胞；凋亡；急性早幼粒细胞白血病[中图分类号]R733．71，R392-33，Q255[文献标志码]AOver-expressionofprohibitingenepromotesapoptosisinretinoieacid-resistantacutepromyelocyticleukemiacelllineNB4-R1LIUYanfeng，HEPengcheng，LIUFeng，CHENGXiaoyan，ZHANGMeiDepartmentofHematology

5、，FirstAfiliatedHospital，MedicalCollege，Xi’allJiaotongUniversity，Xi’an710061，China【AbstractJObjectiveToconstructaeukaryoticexpressionvectorcarryinghumanprohibitingoneandstudytheefectofprohibitinover-expressionontheapoptosisofretinoicacid-resistantacutepromyelocyticleukemiaNB4-R1cells

6、．MethodsTheprohibitingonewasamplifiedbyPCR．andthenclonedintopEGFP-N1-3FLAGeukaryoticexpressionvector．PositiveclonesworeselectedbyPCRscreeningandidentifiedbyDNAsequencing．ThepositiverecombinantvectorpEGFP-N卜3FLAG-prohibitinwastransferredintoNB4-R1cells．Theover-expressionofprohibitinw

7、asverifiedbyrea1．timePCRandWestemblotting．respectively．TheapoptosisrateoftheNB4-R1cellstransfectedwithpEGFP-N1-3FLAG-prohibitinwasmeasuredbyflowcytometrycombinedwithannexinV-FITC／PIstaining．ResultsPCRscreeningandDNAsequencingdemonstratedthattherecombinantplasmidofpEGFP-N1-3FLAG-proh

8、ibitinwasconstructe