防治烟草甲白僵菌的仓储应用菌株选育.pdf

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1、中国烟草学报ActaTabacariaSinicahttp：／／ycxb．tobacco．org．cndoi：10．16472~．chinatobacco．2014．04479植物保护防治烟草甲白僵菌的仓储应用菌株选育张晓敏，杨辉，施鸣，胡大鸣，刘爱英，邹晓1贵州中烟工业有限责任公司贵阳550002；2贵州大学真菌资源研究所贵阳550025；3贵州省烟草品质研究重点实验室摘要：为将白僵菌应用于烟叶储存醇化的仓储环境，对其进行抗干旱、耐高温菌株选育。通过温度筛选获得能够在35℃下生长的球孢白僵菌GZUIFR．GL5菌株。该菌株通过

2、紫外线和微波在150s下的组合诱变和PEG胁迫筛选，得到具有生长稳定且能够耐受．0．8Mpa的较低水势和35℃环境条件的突变菌株GZUIFR．GL5．08i。测定GZUIFR．GL5．08i部分生理指标发现蛋白含量、脯氨酸、SOD、CAT、POD等含量均比诱变前菌株提高，反映了在抗旱机理方面虫生真菌与植物抗逆机理有相似性。关键词：仓储害虫；烟草甲；白僵菌；抗旱机理引用本文：张晓敏，杨辉，施鸣，等．防治烟草甲白僵菌的仓储应用菌株选育[J]．中国烟草学报，2015，21(2)烟叶在储藏期间会面临多种虫害的危害【l】，对一直受到关注，

3、但是在微生物防治领域的研究文献一烟叶危害性最严重的两种害虫为烟草甲(Lasioderma直较少，除一些采用苏云金芽孢杆菌(BT)的应用serricomeFabricius)和烟草粉螟(Ephestiaelutella研究外[7-8]其它微生物防治技术鲜有报道，特别是Hubner)[2]。由于烟叶调拨流通频繁，检疫控制措施昆虫在自然界最主要的微生物天敌一虫生真菌。虫生不是十分有效，储烟害虫的分布区域正逐年扩大，严真菌不仅对人畜及作物无害，其寄主不易产生抗性，重影响了卷烟品质[3】。此外，烟叶等级越高，虫害越具有显著的形成流行病能力

4、和生产便利等优点]，且严重；烟叶储存期越长，虫损越严重【4]。据报道我国虫生真菌制剂安全，与环境相容性好[】。国内率先储存烟叶的直接虫损率为1．64％[5】。目前控制烟草甲筛选了烟草甲成虫的致病真菌[1”，也有学者测试了最为常规的做法是化学熏蒸，效果虽然显著但对操作白僵菌对烟草甲幼虫的毒力效果[121。以上研究结果人员和环境的危害也十分突出，因此开发新的安全防若要应用于烟仓均不太可能实现。主要问题是仓储环治技术迫在眉睫。2007年我国全面禁止了甲胺磷等5境(湿度RH<75％；温度T>32℃)湿度过低温种高毒农药的生产、销售，这反

5、映了国家未来的政策度过高，有研究者将烟草甲的性引诱剂和白僵菌菌粉导向[6】。这些变化说明国家政策和烟草产业形势迫使一起使用并在进行保湿，该方法对烟草甲取得较好的烟草行业向安全、有机、生态方向发展。防治效果。但要实际在仓库中使用，选育出耐高温、在仓储害虫烟草甲的防治技术中生物防治领域虽耐低湿的菌株仍然是重要的途径[1，具有重要意义。表1供试菌株信息Tab．1Informationofexpefiment~strains基金项目：贵州中烟工业有限责任公司计划项目(黔烟工计：200907；201021))；贵州省烟草公司科技项目(黔烟

6、科合：200921)作者简介：张晓敏(1965一)，农艺师，Emaihzhangxm1983@126．com通讯作者：邹晓(1977一)，Emaihcopfinus@126．com收稿日期：2014．02—1280中国烟草学报ActaTabacariaSinica2015Vo1．21No．21材料与方法冷却，再进行照射，并将照射时间累计【1。以辐射时间为微波处理剂量指标，相同条件非辐射菌悬液的1．1供试菌株培养平板作为对照，计算致死率。以致死率超过90％供试菌株在贵州大学真菌资源研究所(GzuIFR)的紫外线诱变剂量150s处理

7、菌悬液，再经微波辐射和贵州中烟工业有限责任公司技术中心均有保藏备150s后涂布在沙氏培养基上，置于30℃±1℃恒温培份。见表1。养箱中培养7d，挑取长得好的菌落于25％PEG60001．2培养基的沙氏培养基中培养，以菌落直径作为复筛标准。沙氏培养基：葡萄糖20g，麦芽糖5g，蛋白胨致死率：堕：堕×10010g，酵母膏5g，琼脂20g，水lO00mL。对照菌落数查氏培养基：NaNO32g，K2HPO4~3H2Olg，1．5生长稳定突变株的验证KCL0．5g，MgSO,"7H2OO。5g，FeSO4·7H2O0．01g，将复筛获得的

8、正突变菌株在沙氏培养基上蔗糖30g，琼脂20g，水1000mL，pH自然。25±1℃连续传代8次，每次传代后接入含25％1．3温度筛选PEG6000的沙氏培养基100mL，30±1℃培养10d将活化好的供试菌株，接种到沙氏和查氏的平洗滤去除培养基后测定菌丝体干重