ELISA法检验乙型肝炎标志物的影响因素分析-论文.pdf

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1、圄匣曩强同2013年11月第11卷第32期·管理·教育·教学·581ELISA法检验乙型肝炎标志物的影响因素分析高梅张凌峰付永航(1解放军458医院检验科，广东广州510602；2解放军458医院输血科，广东广州510602)【摘要】目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)检验乙型肝炎血清标志物的影响因素。方法用酶联免疫吸附试验法检测乙型肝炎血清标志物，对影响检测结果的主要因素进行控制，并进行统计学分析。结果酶联免疫吸附试验检验乙型肝炎血清标志物易受标本、试剂、检测操作、实验室环境、仪器、干扰物质及H

2、D—HOOK效应等因素影响。结论检验人员在操作过程中，加强质量管理，避免或减少影响因素，对提高检测结果准确性具有重要意义。【关键词l酶联免疫吸附试验；乙型肝炎血清标志物；影响因素中图分类号：R446文献标识码：A文章编号：1671-8194(2013)32-0581-02乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)感染引起的一种传染不可重复使用，以避免交叉感染，建议使用一次性吸头。③加样时应性疾病，目前我国乙型肝炎病毒携带患者约有9300万】；乙型肝炎病毒将标本加在微孔反应板底部，同时避免吸头接触微孔反

3、应板底部和孔包膜表面的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)，是病毒在肝细胞表达的产壁。④加样过程中避免液体外溅，如不慎将样本或试剂溅出~LEcF时，物，成人暴露HBV1-12周内血清中开始出现HBsAg，因此，HBsAg的应用吸水纸轻拭吸干，并做好相关记录。血清学检测对乙型肝炎的早期发现、早期治疗具有重要意义；目前酶2-2温育联免疫吸附试验技术(ELISA)是目前最常用的一种检测乙型肝炎血①由于ELISA是根据着色深浅来判定阴阳性，因此，严格按试剂清标志物的方法，具有操作简便、灵敏度高经济环保、便于大规模

4、盒操作说明书控制温育时间，保证足够的反应时间可提高实验灵敏度检测等优点，但在实际检测过程中，检测结果易受多种因素影响，造和结果的准确性。②温育温度应恒定为37~C，用封条封板，避免液体成检测结果假阳性或假阴性；本次研究为保障检测结果的准确性，就成分蒸发或杂质进入孔内影响结果，同时避免频繁开启恒温箱门影响ELISA检验乙型肝炎血清标志物的影响因素进行探讨，报道如下。温度恒定。③温育时微孔反应板不能叠加，因为微孔反应板结构特1材料殊，易产生边缘效应，使板周围和孔内温度升温速度不同，造成孔边1．1标本因素

5、缘与内部结果的差异。①标本量不足可直接影响检验结果，因此，在抽取样本时应抽取2-3洗板足够量血液，以便得到足够血液样本。②标本发生严重溶血时，血清①洗涤液应现用现配，使用新鲜、干净、无菌的蒸馏水或去离子易沉淀于聚乙烯孔，残留的血红蛋白发挥过氧化物酶样作用，可催化水，禁用自来水。②洗板前应将孔内液体含有的纤维带白挑出，同时底物显色，造成结果呈现假阳性】，因此，在采取过程中应防止标本避免液体溅出和孔与孔之间的液体溢出，以免造成“花板”现象[5】。污染，低温保存，必要时分离血清单独保存以避免溶血。③塑料试

6、管③洗板时应确保洗涤液充分注满微孑L反应板各孔，以保证微孔反应板可吸附抗原物质，使样本抗原含量下降，造成结果呈假阴性，因此，彻底洗净。④洗板后微孔反应板应在吸水纸上轻轻拍干，甩干时，应采血时尽量使用一次性玻璃试管或真空采血管。④血清标本中残留纤保证甩动速度要快，可避免洗涤液甩人邻孔。维蛋白原，易影响检测结果，因此，血液标本应置于室温下1-2h，使2．4显色血液凝固，然后对血液进行离心后再检测，同时可加大离心转速，延①显色剂要现用现配，不使用过期显色剂。②显色要避光反应，长离心时间，以促使血细胞和纤维

7、蛋白完全沉淀，减少标本中的非特严格按照说明书放置放够时间，以避免滴度低的标本反应不出来，形异性物质。⑤对无法及时检测的标本，应妥善保存于4℃冰箱内，并成假阴性。③加入终止液时要避免产生气泡造成假阳性，加终止液后准确标注待检者姓名、日期等，做好原始记录；冰冻保存时切忌反复应及时在15min内比色。冻融，以避免引起假阳性；从冰箱取出的标本应预温至室温，充分融2．5读数化混匀后再行检测。酶标仪读数时应保证微孔反应板底部清洁，严格按说明书的规定1．2试剂因素进行读数和结果判读，对不符合临床模式或少见模式的可

8、疑标本，要①试剂盒应选用质量稳定可靠的产品，不同生产厂家的乙型肝炎进行复检，避免错误报告。血清学标志物检测试剂其灵敏度和特异性存在一定的差异，可对检测3环境因素结果产生直接影响。②试剂在运输过程中易受多种因素影响，试剂应实验室环境也是影响检测结果的重要因素之一，实验室温度应维妥善保存于4℃冰箱内]，使用前先预温至室温，并做好冰箱温度记持在室温，空气湿度控制在35％~65％之间；通风防尘，具有良好的采录，避免频繁开关冰箱，影响冰箱温度的恒定。③不同批号的试剂不光；消除噪