和厚朴酚衍生物对肝癌细胞（HepG2）凋亡的影响-论文.pdf

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1、第1期和厚朴酚衍生物对肝癌细胞(HepG2)凋亡的影响LLIL科研与开发t，tt’和厚朴酚衍生物对肝癌细胞(HepG2)凋亡的影响仇鲸翔陈俐娟(四川大学生物治疗国家重点实验室，四川成都，610064)／摘要为探讨和厚朴酚衍生物对肝癌细胞的毒性，在合成了6个和厚朴酚衍生物的同时，并应用MTT分析和细胞流式分析等手段研究了活性较好的厚朴酚3#H对肝癌HepG2细胞凋亡的影响。采用倒置显微镜观察细胞的形态学的改变，用流式细胞分析技术测定亚二倍体峰等方法检测该药物对细胞凋亡影响，结果表明和厚朴酚3#H可明显诱导HepG2细胞凋亡。关键词：和厚朴酚衍生物肝癌HepG2细胞细胞凋亡我

2、国常用中药材厚朴为木兰科植物厚Sb(Mag-解，配制成4OM的储存液备用，其中，DMEM及noliaofficinalisRehd．etwi1s)或凹叶厚朴的干燥干RPMI1640培养基，胎牛血清(FBS)等试剂均购自皮、根皮及枝皮，具有燥湿消痰、下气除螨之功效，用兰州民海生物公司。四氮唑盐(m)：Sigma公司于食积气滞，腹胀便秘，痰饮喘咳等。现代药理研究产品，使用前先用生理盐水配制成5g／L储存液，二表明，厚朴具有影响胃肠活动、抗菌、镇咳、肌肉松弛甲基亚砜(DMSO)：Sigma公司产品，其余普通试剂和中枢抑制等作用[1]。和厚朴酚(Honokio1)带有均为国产的分

3、析纯。烯丙基的连苯二酚类化合物一是厚朴的主要化学成1．2实验方法分。研究人员发现，和厚朴酚表现出多种药理作用，1．2．1化合物合成如抗炎、抗心律失常、抗癫痫[、抗血小板聚集等。某些酚类化合物可以和一分子甲醛及胺发生此外，有研究报道和厚朴酚还可以抑制氮氧化产物Mannich反应。根据实验室已有的研究结果[引，我和肿瘤坏死因子TNF的产生[2]。为了寻找和开们通过微波促进的Mannich反应对和厚朴酚酚羟发高效、低毒的抗肿瘤活性化合物，我们以和厚朴酚基临位进行修饰，合成了以下1#H一6#H衍生为母体，通过“Mannich反应”对其进行结构修饰，合物。成了数个和厚朴酚的衍生物，

4、采用MTT法测试了和厚朴酚衍生物对不同肿瘤细胞的毒性作用，并进1．2．2细胞培养一步采用细胞流式分析手段研究了和厚朴酚衍生物HepG2细胞采用实验室的常规培养方法培养，对肝癌HepG2细胞凋亡的影响。该细胞于含1O胎牛血清、100U／mI青霉素和100mg／L链霉素的DMEM培养液中，置饱和湿度1材料与方法37度的59，6C02培养箱中培养。1．1实验材料1．2．3肼试验和厚朴酚(Honokio1)购买于成都科华生物技术取对数生长期的HepG2细胞单个核细胞，以5公司(纯度大于999，5)，和厚朴酚衍生物本实验室合×10个细胞／孔的密度接种于96孔板中培养。实成，合成过程

5、参照本实验室的研究成果，同时略作修验组设立8个药物浓度组，每组HNK的终浓度为改引，用纯度大于99的二甲基亚砜(DMSO)溶5、1O、15、2O、25、3O、35、40ttg／mL，每个药物浓度组2四川化工第17卷2014年第1期设8个复孔。对照组加入同样浓度的二甲基亚砜I，轻轻震荡10分钟后，用酶标仪于490nm处测(DMS0)，每个剂量五个平行孔。分别于12、24、48出各孔吸光度值OD，近下式计算细胞抑制率：根据小时取一块96孔培养板，板中每孑L加入新鲜配制的公式：细胞抑制率()一(1一给药孔平均OD值／对浓度为5mg／mL的MTT2OL。继续培养3h后照孔平均OD

6、值)×100％。取出培养板，小心吸弃培养基，每~LJJ,DMSO150OH+HCHO+r／"-x～MV,EtOHHN，，J———’#H：X=O．R=none2#H：X=N．R：CHa3#H：X=C．R=NH2图1l#H-6#H化合物的合成1．2．4用流式细胞仪检测Sub凋亡峰表16个和厚朴酚衍生物对肿瘤细胞抗增殖活性收集药物作用后的HepG2细胞，用PitS洗一次，用预冷的7O乙醇于4度固定至少12h。离心后的细胞并用PBS冲洗、再用含50mg／I的PI，lg／IRNAase及0．19／6TritonX-100的染料溶液冰浴避光孵育30rain后。流式细胞仪分析。激发波错

7、辨错HHH．长488nm，发射波长630rim。DNA含量X少X于X正常=IJII二倍体细胞的亚二倍体细胞比率计为凋亡S比C率N。RRR1．2．5统计分析=lJlI100实验数据采用Mean±SD表示，检测的调亡数80，r—_．●一-2l#群H据比例用SPSS13．0软件中的ANOVA进行统计比较，主要检测各种数据间是否存在差异的显著性，褂卜HP值小于0．05视为具有显著性差异。妞呻钳H纂5#H嚣2实验结果2O—●一6#H2．1和厚朴酚衍生物抗增殖活性比较00510204o80120为了比较和厚朴酚衍生物对肿瘤细胞抗增殖活浓度