MiR-486-5p在肝癌中的表达及其对肝癌细胞生长的影响-论文.pdf

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1、《现代免疫学}2014年第34卷第1期MiR一486—5p在肝癌中的表达及其对肝癌细胞生长的影响黄馨萍，侯晋，沈筱芸，陆海娟，罗小玲(1．广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部，南宁530021；2．第二军医大学医学免疫学国家重点实验室，上海200433)摘要：本研究旨在探讨肝癌中miR一486—5p的表达及其对肝癌细胞生长的影响。首先，通过qRT—PCR对4O例肝癌患者的肝癌组织及其癌旁组织、以及肝癌细胞系(QGY一7701、QGY一7703、BEL一7404、SMMC一7721、Huh7、HepG2和PCL／PRF／5)进行miR一486—5p表达水平的验

2、证；然后，合成miR一486—5p模拟物及其阴性对照物NC，分别转入上述七种肝癌细胞，采用CCK8试剂检测miR-486—5p对肝癌细胞生长的影响；最后，采用流式细胞术检测miR一486—5p对肝癌细胞周期和细胞凋亡的影响。结果显示，与miRNA第二代高通量大规模平行测序(miRNomesMPSS)结果一致，miR一486—5p在肝癌组织和肝癌细胞中显著低表达(Pd0．05)。CCK8检测结果表明，转染miR一486—5p模拟物能有效、稳定的抑制上述七种肝癌细胞的生长(Pd0．05)。流式细胞仪检测发现，过表达miR一486—5p能促进肝癌细胞凋亡(QGY

3、一7703细胞，P<0．001；QGY一7701细胞，Pd0．01)，及诱导细胞周期阻滞在G1期(Pd0．01)。研究结果表明，miR一486—5p在肝癌组织中低表达；重建肝癌细胞内miR-486—5p的表达，可有效诱导肝癌细胞周期阻滞和凋亡，从而抑制肝癌细胞生长，提示miR一486—5p可能在肝癌的发生发展中起着重要作用。关键字：肝癌；miR一486—5p；细胞周期；凋亡中图分类号：R593文献标志码：A文章编号：1001—2478(2014)Ol一0007—07microRNA(简称miRNA)，是近年来发现的MPSS)发现，在肝癌组织中有许多异常表达

4、的一类长约19—25个碱基的非编码单链小RNA，被miRNA，尤其是miR一486—5p在肝癌miRNomes表认为是表达调控领域的重大突破。它能够通过完全达谱中呈现较一致的异常低表达_6]，提示其可能在互补和不完全互补的方式靶向作用于mRNA的3’肝癌的发生发展中起着重要作用。因此，本研究旨非编码区域(3’untranslationregion，3’UTR)，在对miR一486—5p在肝癌中的表达作进一步验证，从而降解靶基因的mRNA或者抑制靶基因的翻并探讨其对肝癌细胞生长的影响及机制，对miR一译，在转录后水平上对基因实现负调控作用。目前486—5p的

5、功能作初步研究。认为，人类体内至少含有30的基因表达受miR—1材料与设备NA调控。越来越多的证据表明miRNA参与肝癌细胞增殖、凋亡、转移，血管生成和肿瘤干细胞1．1组织样本本研究的样本均来自广西医科大形成等生物学过程]。因此，研究那些在肝癌中学附属肿瘤医院，为在肝胆外科住院治疗的肝癌患异常表达的miRNA及其调控的靶点显得极其重者经手术切除的肝癌组织及癌旁组织标本，肝癌组要，它为进一步揭示肝癌新的潜在机制和寻找有效织及对应的癌旁组织来源于同一肝癌患者。这些组的治疗靶点提供理论基础。织标本在手术切除后，立即冻于液氮中保存，直至我们先前开展的正常肝组织、肝

6、炎肝组织、肝被取出用于RNA抽提。所有组织样本的获取均已硬化肝组织和肝细胞肝癌(hepatocellularcarcino—取得患者的知情同意。ma，HCC)组织的miRNA的第二代高通量大规模1．2细胞系人肝癌细胞系HepG2、Huh7、平行测序(massivelyparallelsignaturesequencing，PCL／PRF／5、SMMC一7721、BEL一7404、QGY一7701，QGY一7703和正常肝细胞HL-7702均为本实验室保存。收稿日期：2013—11-011．3主要试剂和抗体RPMI1640、胎牛血清基金项目：第二军医大学免疫

7、学研究所暨医学免疫学国家重点实验室开放课题(FBS)，均购自PAA公司(PAALaboratoriesGm—作者简介：黄馨萍，女，硕士，主要从事肿瘤免疫和生物治疗研究bH，Pasching，Australia)；含有miRNA的组织通讯作者：罗小玲(E—mail：1044203798@qq．corn)总RNA，利用TRIzol(Invitrogen)进行提取；《现代免疫学~2014年第34卷第1期CCK8试剂，购自Dojinodo公司(Dojinodo，Ja—的反转录试剂盒，为miRCURYLNAwUniversalpan)；体外转染所用的miR一486—

8、5p和NC模拟RTmicroRNAPCRkit(EXIGONInc