仿刺参过氧化氢酶基因全长cDNA的克隆及表达分析.pdf

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1、中国农业科技导报，2014，16(2)：127—134JournalofAgrieuhuralScienceandTechnology仿刺参过氧化氢酶基因全长eDNA的克隆及表达分析高杉，周遵春，董颖，杨爱馥，陈仲，王摆，关晓燕，蒋经伟，姜北(辽宁省海洋水产科学研究院，辽宁省海洋水产分子生物学重点实验室，辽宁大连116023)摘要：研究仿剌参(Apostichopusjaponicus)免疫相关基因的功能和作用机制可为仿刺参养殖病害的防控提供科学依据。克隆了仿刺参过氧化氢酶(catalase)基因的全长cDNA序列，全长1885bp，其中5．非翻译区(5untranslatedreg

2、ion，UFR)长76bp，3一UTR长306bp，开放阅读框(openreadingframe，ORF)1503bp，编码500个氨基酸，预测蛋白分子量为56．56kDa。氨基酸序列比对结果显示，仿刺参Catalase与三角帆蚌(Hyriopsiscumingii)和紫海胆(Strongylocentrotuspurpuratus)的相似度最高，为75％。仿刺参catalasecDNA推导的氨基酸序列具有过氧化物酶定位信号PTS2、与还原型辅酶Ⅱ(NADPH)结合的氨基酸残基及与其它物种高度保守的Catalase近端血红素配体签名序列(RLFSYSDTH”)。系统进化分析显示仿刺参

3、处于无脊椎动物分支中，和紫海胆位于同-d'支上。实时定量PCR结果显示，catalasemRNA在仿刺参肠、体壁、肌肉、呼吸树、体腔细胞和管足中均有表达，在肠中表达量最高。在细菌脂多糖LPS刺激后4h，体腔细胞中catalasemRNA表达量显著升高，表明仿剌参的catalase基因在应对外来病原菌刺激的免疫应答中发挥了重要作用。关键词：仿刺参；过氧化氧酶基因；LPS刺激doi：10．13304／j．nykjdb．2013．442中图分类号：Q786；$917文献标识码：A文章编号：1008-0864(2014)02—0127—08Full-lengthcDNACloningandE

4、xpressionAnalysisofcatalaseGenefromSeaCucumber(Apostichopusjaponicus)GAOShah，ZHOUZun-chun，DONGYing，YANGAi—fu，CHENZhong，WANGBai，GUANXiao—yan，JIANGJing-wei，JIANGBei(LiaoningKeyLabofMarineFisheryMolecularBiology，LiaoningOceanandFisheriesScienceResearchInstitute，LiaoningDalian116023，China)Abstract：

5、Studyingthetimctionandmechanismofimmune—relatedgenescanprovidescientificreferenceforpreventingandcontrollingdiseasesinseacucumber(A．japonicus)culture．Inthisstudy，thefull—lengthcDNAofcatalasegenefromA．japonicuswasclonedandcharacterizedforthefirsttime，whichwas1885bpincludinga76bp5一untranslatedreg

6、ion(UTR)，1503bpORFencoding500aminoacids，anda306bp3'-UTR；andthepredictedmolecularweightwas56．56kDa．Theresultofaminoacidsequencealignmentshowedthat75％aminoacidsequenceidentitytotheCatalaseofHyriopsiscumingiiandStrongylocentrotuspurpuratus．TheperoxisomaltargetingsignalPTS2，NADPHbindingresidues，and

7、heme—ligandbindingsignalsequences“RLFSYPDTH’’wereidentifiedinthededucedaminoacidsequenceofCatalasefromA．叩onc．PhylogeneticanalysissuggestedthattheCatalaseofA．japonicuswasclosetothatofS．purpuratusininvertebratecluster．Quantitativere