基于G-四链体-氯血红素DNA酶的传感器对血清中甲胎蛋白的检测-论文.pdf

《基于G-四链体-氯血红素DNA酶的传感器对血清中甲胎蛋白的检测-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第l4卷第l4期2014年5月科学技术与工程Vo1．14No．14May2014167l一1815(2014)14—0005—05ScienceTechnologyandEngineering⑥2014Sci．Tech．Engrg．化学基于G．四链体．氯血红素DNA酶的传感器对血清中甲胎蛋白的检测孙艳丽(菏泽学院化学化工系，荷泽274015)摘要建立了一种夹心式用于检测血清中甲胎蛋白(alpha—fetoprotein，AFP)的新型传感器。利用微孔板表面羧基与抗体表面的氨基之间的相互作用，将AFP的单克隆抗体(monoelonalantibodies，McAbs)修饰

2、到微孔板的表面；再利用抗体抗原的定向固定效应，将AFP键合到McAbs的表面，接着将生物素标记的AFP单克隆抗体(biotinylatedMcAbs)与AFP结合；最后，利用链霉亲和素(streptavidin，SA)与生物素的特异性结合作用，将G一四链体-氯血红素DNA酶键合到生L物素标记的单克隆抗体上，从而制得高灵度、高特异性的AFP传感器。用2，2-联氮一二(3一乙基一苯并噻唑一6一磺酸)二铵盐(ABTS)一HO体系检测AFP的浓度，信号值与AFP的浓度在0．05ng·mL至20ng·mL之间成线性关系，检测限为0．02ng·mL～。此传感器可应用于血清中AFP的

3、检测。关键词G．四链体-氯血红素DNA酶甲胎蛋白(AFP)免疫传感器中图法分类号0657．32；文献标志码A甲胎蛋白(alpha—fetoprotein，AFP)是一种胚胎生物分子。蛋白，主要来自胚胎的肝细胞，健康成人体内甲胎蛋甲胎蛋白AFP的分子结构中有两个可以结合白的含量一般不超过20g·L～。但在肝癌、卵巢抗体的位点，这有利于形成三明治结构的传感器。癌、胚胎细胞肿瘤患者的血清中甲胎蛋白的含量会在这里，用比较简单的方法合成了一个三明治式的明显升高，因此血清中AFP的准确检测对某些癌症基于G一四链体．氯化血红素DNA酶的传感器，这种尤其是原发性肝癌的早期诊断、早期治疗

4、有重要的传感器可以定量检测人体血清中的AFP。临床意义卜。1实验部分G．四链体(G—quadruplexes)是一类富含鸟嘌呤的特殊DNA二级结构，作为重要的DNA调控结构，1．1主要仪器及试剂存在于人类基因组许多重要的区域。研究发DNAG10：5-Biotin—TTTTTTTTTTTTTGGGTAG—现，某些G-四链体可以与氯高铁血红素(hemin)结GGCGGGTTGGGAAA．3由上海Sangon生物科技有合形成具有过氧化物酶活性的G．四链体．氯血红素限公司合成；高氯铁血红素(hemin)、牛血清蛋白DNA酶(G—quadruplexes-heroinDNAzym

5、e)。这种酶(bovineserumalbumin，BSA)、明胶、链霉亲和素可以高效的催化鲁米诺或2，2一联氮．二(3一乙基一苯(streptavidin，SA)和ABTS购自Sigma—Aldrich公并噻唑-l5．磺酸)二铵盐(ABTS)等以HO为中间体司；3O％HO：购自上海国药；甲胎蛋白(alpha—feto-的氧化还原反应，并引起化学发光或者颜色的变protein，AFP)与癌胚抗原(carcino-embryonicanti-化⋯。作为一类重要的DNA酶，G一四链体一氯血gen，CEA)购自艾碧康生物生物制品有限公司；AFP红素DNA酶近年来在分析化学领域

6、受到了越来越抗体(anti．AFPmonoclonalantibodies，McAbs)和生多的关注。相比传统的蛋白质酶，这种人工得到的物素标记AFP抗体(anti—AFPbiotinylatedMcAbs)酶更廉价、易于制备储存、也更容易标记和操作⋯。购自USBIO。因此，更利于采用化学发光或比色的方法检测一些HEPES缓冲溶液的配制：25mmol·L’。HEPES，pH7．4，20mmol·L～KCI，200mmol·L～NaCI，2013年12月15日收到山东省高等学校科技计划项目(J10LB64)、0．05％(w／v)TritonX一100，1％(v／v)DMS

7、O；山东省自然科学基金项目(2R2009BM003)资助TE缓冲溶液的配制：10mmol·L～Tris—HC1，作者简介：孙艳丽(1985一)，女，山东郓城人，硕士。研究方向：分析0．1mmol·L～EDTA，pH7．4；化学、化学传感器。E-mail：aspiration8502@163．corn。40KT缓冲溶液的配制：pH6．2，100mmol·14期孙艳丽，等：基于G一四链体一氯血红素DNA酶的传感器对血清中甲胎蛋白的检测70宴Jo∞《Dugqj0∞q、、氧化型ABTS·+并O产生蓝0绿色O的光0，最大O吸收0波长[(25±1)o