嗜肺军团菌15种血清型基因芯片检测方法的建立-论文.pdf

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1、食品研究与并发2014年7月生物工程FoodResearchAndDevelooment第35卷第14期99DOI:10.39690.issn.1005-6521.2014.14.028嗜肺军团菌15种血清型基因芯片检测方法的建立吴冬雪,王乃福,黄晨,高旗利,关淳(天津出入境检验检疫局,天津300456)摘要:建立一种多重PCR技术结合基因芯片检测方法,实现嗜肺军团茵15种血清型的快速、准确检测。根据嗜肺军团茵15种血清型的O抗原特异性基因设计并筛选合适的引物和探针,进行多重PCR扩增,制备寡核苷酸芯片。将多重PCR扩增产物与带有特异探针的芯片杂交

2、。用扫描仪扫描,判定嗜肺军团菌的血清型。该基因芯片可特异性的检测嗜肺军团茵的15种血清型,具有良好的特异性,芯片纯茵DNA检测灵敏度为10ng。所建立的嗜肺军团茵15种血清型基因芯片检测方法特异性好,灵敏度高,具有较好的实用性。关键词:嗜肺军团茵;基因芯片;多重PCRDevelopmentofaDNAMicroarrayforDetectionandIdentificationof15DistinctOAntigenFormsofLegionellaPneumophilaWUDong—xue,WANGNai—fu,HUANGChen,GAOQi—l

3、i,GUANChun(TianjinEntry—ExitInspectionandQuarantineBureau,Tianjin300456,China)Abstract:Toestablisharapid,accuratedetectionmethodfor15distinctOantigenformsofLegionellapneumophilausingDNAmieroarraycombinedwithmultiplexPCR.Thespecialgenesofthese15distinctOantigenformsofL.Pneumoph

4、ilawereastargetgenesformuhiplexPCRrespectively,thenprimersandcapturedoligonucleotideprobeswerehybridizeswithDNAmicroarray,whichcontainedspecificprobesofLegionellapneumophila.Scannerwasusedtodeterminantthetypesofbacterium.TheDNAmicroarrayassaycandetect15distinctOantigenformsofL

5、.Pneumophilaspecially.ThesensitivityoftheDNAmicroarraywas10ng.Thedetectionmethodof15distinctOantigenformsofLegionellapneumophilabyDNAmicroarraywasestablished.Thedetectionmethodhasbetterspecificity,sensitivityandrepeatability.Keywords:Legionellapneumophila;DNAchip;multiplexPCR军

6、团菌是一种无芽胞革兰氏阴性杆菌,对自然环达70%~90%。截至目前,嗜肺军团菌l5个血清型里境因素抵抗力较强,主要引起呼吸道传染病,即军团面只有01型的0抗原基因簇序列已被报道及研究,病(Legionnairesdisease),严重的可导致肾衰竭。据统其他14种血清型没有任何的序列公布。在嗜肺军计,约90%军团菌病是由嗜肺军团菌(Legionella团菌血清型分型领域,包括我国在内的许多国家的检pneumophila)~l起。嗜肺军团菌广泛存在于各种自然验实验室普遍采用传统培养和抗血清试验的方法,检水源及人工管道水源中,可通过气溶胶的方式在空气验

7、方法繁琐、费时费力,而且大部分血清极难生产。国中散布,人类会因为吸入含菌的气溶胶或饮用受污染际上生产细菌表面抗原血清的三家主要公司提供的水源而感染。嗜肺军团菌有15个血清型,均具有对血清种类不足实际需要的5O%。基因芯片技术是近年人体的致病性,其中血清型0l型引起的疾病所占比例来兴起的一种基因诊断技术,自1995年被应用以来,已广泛应用于基因图谱绘制、基因表达分析、疾病诊基金项目:国家质检总局科技计划项目(项目编号2011IK145)作者简介:吴冬雪(I983一),女(汉),工程师,硕士,研究方向:食品断、药物筛选、疫苗研制、环境监测等多个领域l5

8、_7J。本微生物检验。试验以世界范围内较为流行的嗜肺军团菌血清群为吴冬雪,等:嗜肺军团菌15种血清型基因芯片检测方法的建立

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