南瓜ISSR-PCR反应体系的建立与优化-论文.pdf

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1、分子植物育种，2014年，第12卷，第4期，第802-809页MolecularPlantBreeding，2014，Vo1．12，No．4，802—809技术主题TechnologyFeature南瓜ISSR—PCR反应体系的建立与优化朱海生·，2卢丽芳，温庆放1,2’林义章31福建省农业科学院作物研究所，福州，350013；2福建省农业科学院蔬菜研究中心，福州，350013；3福建农林大学园艺学院，福州，350002通讯作者，541585978@qq．com摘要为获得南瓜ISSR最优扩增体系，为后续南瓜的遗传多样性分

2、析和亲缘关系鉴定奠定基础，本研究以‘密本’南瓜为筛选体系材料，采用单因素试验，对ISSR反应体系的M、dNTP、Taq酶、引物和DNA浓度等5个因素进行优化。研究结果表明，南瓜ISSR25L最佳反应体系为：2．5L10xBufer，2．0mmol／LM，0-3mmol／LdNTP，1U酶，0．48mmol／L引物，75ng的DNA。在此基础上，对筛选出的12条引物进行退火温度的优化，最终确定每条引物的最佳退火温度。利用该反应体系，选用引物891对85个南瓜品种进行所确立扩增体系的验证，结果显示扩增产物条带清晰明亮、多态性

3、丰富，且特异性强、重复性好，表明本研究所确定的反应体系适用于南瓜的ISSR分子标记。关键词南瓜，ISSR，分子标记，PCR扩增EstablishmentandOptimizationofISSR—PCRAmplificationSysteminSquashZhuHaisheng。LuLifangWenQingfang。LinYizhang。1CropsResearchInstitute，FujianAcademyofAgriculturalSciences，Fuzhou，350013；2VegetableResearch

4、Center，FujianAcademyofAgriculturalSciences，Fuzhou，350013；3CollegeofHorticulture，FujianAgricultureandForestryUniversity,Fuzhou，350002Correspondingauthor，541585978@qq．comIX)I：10．132718．mpb．012．000802AbstractInordertoobtaintheISSR—PCRreactionsystemofSquash，Wetookano

5、ptimizationexperimentwithsinglefactordesignwhichwasconcentratedonfivefactorsofMg2+，dNTP，7EINApolymerase，primerandtemplateDNAbyusingthesquash‘miben’asthematerialoffiltersystemtosetupagoodfoundationofanaly-singthegeneticdiversityandrelationshipidentificationofSquas

6、h．Thetestresultshowedthatthegreatest25LISSRreactionsystemwhichcontained2．5IxL10xBufer，2．0mmol／LM，0．3mmol／LdNTP，1UTaqDNApolymerase，0．48mmol／Lprimer，75ngtemplateDNA．Onthisbasis，optimizedannealingtemperatureof12primerswhichhavebeenscreened，andultimatelydeterminedthe

7、optima1annealingtemperatureofeachprimer．85squasheswereamplifiedwithprimer891undertheoptimizedreactionconditions．Thetestresultshowedtheamplificationproductswhichwereclearandbright，abundantpolymorphism，strongspecificityandgoodrepeatability．Accordingly．itwassuitable

8、forISSRanalysisofsquash．KeywordsSquash，ISSR，Molecularmarker，PCRamplification南瓜(CucurbitamoschataL．)属于葫芦科(Cucur-贮存、适应性强，具有多种保健功能，从而获得“世界bitaceae)南瓜属(Cucurbita)的