染料结合2μm无孔硅胶亲和填料的制备与应用

《染料结合2μm无孔硅胶亲和填料的制备与应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、第tz卷第x期色谱²¯qtz²qxt

2、

3、

4、年

5、月¨³·qt

6、

7、

8、Ξ染料结合ΛP无孔硅胶亲和填料的制备与应用沈丽o熊博晖o丛润滋o王俊德k中国科学院大连化学物理研究所o辽宁大连ttystul摘要}在uΛ°无孔硅胶表面键合v2氨丙基2三乙氧基硅烷klo并与三嗪染料活性蓝vk¬¥¤¦µ²±¯¸¨vol反应o制得亲和色谱填料o并采用扫描电镜元素分析³稳定性测试对此填料进行鉴定与表征∀该填料具有良好的色谱性能o且对生物大分子有一定的亲和选择性o改变³值及离子强度对溶菌酶的结合量有明显影响o可用于分离卵清蛋白k¹¤¯l和溶菌酶k¼¶lo且对Α2oΒ2oΧ2球蛋白有不同

9、的亲和作用o并可从鸡蛋清中制备少量溶菌酶∀关键词}亲和色谱o无孔硅胶o活性蓝vo溶菌酶o卵清蛋白oΑ2球蛋白oΒ2球蛋白oΧ2球蛋白中图分类号}yx{文献标识码}文章编号}tsss2{ztvkt

10、

11、

12、lsx2swuz2sw前言v2氨丙基2三乙氧基硅烷o搅拌回流uw«o用苯三氯近年来o亲和色谱已经成为分离生物大分子最甲烷分别抽提u§o烘干待用∀有效的手段之一∀传统的亲和色谱一般采用多糖类表面改性无孔硅胶与活性蓝v在含sqx凝胶作为基质o存在机械稳定性差承受压力小等缺°²¯Ù¯的sqt°²¯Ù³{qs磷酸缓冲液中于点o不能进行快速淋洗o且分离时间长o易造成生物ysε

13、下反应v«∀产物2依次用水sqt分子的变性失活∀随着高效亲和色谱的兴起与发°²¯Ù磷酸缓冲液体积比为tΒt的甲醇2水甲展o硅胶t 金属氧化物u 合成高分子材料vow 等都醇水洗至无色o烘干∀可用于亲和色谱∀t

14、{{年±ª¨µx 将无孔硅胶应用q染料结合量的测定于亲和色谱后o无孔填料因其良好的动力学和热力称取2ty∗ys°ªo加入t°²¯Ù学性能y ¤溶液o加热溶解o所得蓝色溶液在yus±°处o已广泛应用于反相色谱离子交换色谱z 高效疏水作用色谱{ 等∀测吸光度o得出染料结合量∀本文使用粒径为uΛ°的无孔硅胶klo表面q³稳定性测试键合v2氨丙基2三乙氧

15、基硅烷kl后o与活性蓝将2置于不同³值的含sqx°²¯Ùvkl反应o所得蓝色微球k2l作为固¯的xs°°²¯Ùµ¬¶2¯缓冲溶液中o振荡uw定相o可用于分离卵清蛋白k¹¤¯l和溶菌酶k¼¶lo«o离心取上清液∀在分光光度计上u{s±°处测吸光并对Α2oΒ2oΧ2球蛋白有不同的亲和作用∀度o计算不同³值下染料泄漏量∀实验部分q色谱过程将自制2填料以匀浆法装柱kxs°°1仪器和试剂日本岛津2ts泵o美国«¨²§¼±¨ztux进≅x°°¬q§qlo流动相采用xs°°²¯Ùµ¬¶2¯体样阀o岛津2ts紫外2可见检测器o色谱数据工系o以含t°²¯Ù¯和ushk体积分数l乙二醇

16、的作站k中科院大连化学物理研究所lozut紫外2可见µ¬¶2¯溶液等度洗脱o检测波长u{s±°∀分光光度计k上海第三分析仪器厂lo2u调速多用结果与讨论振荡器k江苏国华仪器厂l∀qΝΠΣ-ΑΧΒ的性能活性蓝vk¬ª°¤lov2氨丙基2三乙氧基硅烷由石油大学重质油国家重点实验室提供oko¯¸®¤lo三羟甲基氨基甲烷kµ¬¶o¯¸®¤lo溶粒径为uΛ°o粒径分布偏差在xh以内o测得表面积为u{ 菌酶k上海生化所loΑ2oΒ2oΧ2球蛋白k¨µ¹¤公司low°Ùªo其外形见图t∀其它试剂都为分析纯∀无孔硅胶表面积小o相应的键合量也较1键合相合成少o元素分析测得键合硅胶的质

17、量分数为无孔硅胶经酸处理o烘干∀将适量硅胶于t{sεsqyth∀以的质量分数为计算标准o在硅胶下真空干燥y«o加入适量¤丝干燥甲苯吡啶和上的键合量为xy1xΛ°²¯Ùª~按结晶点阵计算o硅胶Ξ收稿日期}t

18、

19、{2ts2svo修回日期}t

20、

21、

22、2sw2u{wu{色谱第tz卷u

23、 交换作用占主导地位表面羟基数为{个Ù±°o无孔硅胶表面羟基数为o因此可通过增加盐浓度来进xvqtΛ°²¯Ùªo硅烷键合量反而大于硅胶表面羟基行洗脱∀实验还发现只用乙二醇无法将¼¶洗脱o只数o原因可能是无孔硅胶键合量太小o元素分析误差有乙二醇和¯合用才能得到尖锐的色谱峰∀较大o也可能是硅烷化试

24、剂发生了自聚∀图不同SΗ下的吸附量ΦιγqΤηεαPουντοφΛψσαδσορβεδατδιφφερεντSΗ图ΛP无孔硅胶的扫描电镜图ΦιγqΣχαννινγελεχτρονPιχρογραSηοφΛPνον-Sορουσσιλιχαβεαδσ2溶于¤溶液后o测得染料在硅y 所得结果胶上的结合量为uªÙo与±ª¨µt1uªÙ相比o结合量略有增加o载量也有增加∀配基泄漏一直是亲和色谱中令人头疼的问题o泄漏的染料配基在紫外有吸收o会干扰蛋白质的