氮源对隐甲藻_crypthecodiniumcohnii生长_和dha产量的影响

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1、第20卷第期5海洋通报Vol.20No.52001年月10MARINESCIENCEBULLETINOct.2001氮源对隐甲藻(Crypthecodiniumcohnii)生长*和DHA产量的影响1112王菊芳吴海珍梁世中陈峰1(,华南理工大学食品与生物工程学院广州510640)2(香港大学植物学系香港摘要研究了氮源对隐甲藻CrypthecodiniumcohniiATCC30556生长及DHA产量的影响结果表明采用单一氮源胰蛋白胨和蛋白胨有利于隐甲藻生长在总氮量0.34g/L浓度下隐甲藻生物量分别达到2.78gDW/L和2.70gDW/L蛋白胨培养时DHA产量最高为3

2、38.56mg/L保持总氮量不变采用蛋白胨和硝酸钾为复合氮源当混合氮源中蛋白胨-N硝酸根为-N12时隐甲藻有着最大的生物量和DHA产量分别为2.98gDW/L和527.97mg/L关键词氮源隐甲藻DHA[13]微藻能生产多种多不饱和脂肪酸,其中的二十碳五烯酸EPA和二十二碳六烯[4]酸DHA在疾病预防及治疗方面已引起了广泛的兴趣利用微藻工业化生产多不饱和脂肪酸是一个非常有前景的商业领域经研究发现隐甲藻Crypthecodiniumcohnii具[5]有较高的产DHA能力本研究小组获得了一株异养生长速度快DHA产量高的隐甲藻藻[6]种Crypthecodiniumcohni

3、iATCC30556本研究探讨了氮源对该藻种生长及产DHA量的影响以期降低成本获得最佳氮源为工业化培养隐甲藻生产DHA提供指导依据1材料与方法1.1藻种及其培养隐甲藻CrypthecodiniumcohniiATCC30556由香港大学植物学系陈峰博士筛选采用5%接种量在25170r/min条件下摇瓶培养1.2培养基组成及氮源[7]采用Porphyridium培养基每升基础培养基中含人造海水500mL蒸馏水400mL泥土浸出液100mL胰蛋白胨1g酵母抽提物1g葡萄糖5g所选用的单一氮源有胰蛋白胨蛋白胨硝酸钾硝酸钠硝酸铵尿素共种6总含氮量为0.34g/LpH维持在6~6.

4、8之间在保持总氮量不变的前提下以蛋白胨和硝酸钾为混合氮源设置不同的含氮比蛋白胨-N硝酸根-N分别为3:12:11:11:21:3收稿日期2000-10-16*广东省自然科学基金970486资助项目5期王菊芳等氮源对隐甲藻(Crypthecodiniumcohnii)生长和DHA产量的影响191.3细胞干重的测定100mL4样液装入预先称重的离心管中000r/min离心10min沉淀用蒸馏水清洗3次50真空下干燥定期取出在干燥器内冷却后称重直至恒重1.4脂质提取[8]用改进的和BlighDyer法提取脂质1.5DHA含量测定脂质成分加入一定量内标物十七烷酸用甲醇钠/甲醇溶液

5、甲酯化用正己烷多次萃取收集后氮气吹干重新定容后用毛细管气相色谱法分析色谱条件热导池检测器DB-5毛细管柱0.35mm15m载气为氦气流速20mL/min初温170保留2min升温速率8/min终温235保留8min汽化室温度及检测器温度均为265气相色谱法分析的标准品色谱图和样品色谱图见图1标准品样品图1标准品和样品色谱图2结果与分析2.1不同氮源对Crypthecodiniumcohnii生长和DHA累积的影响从图2可见对生长和DHA积累有利的氮源是胰蛋白胨和蛋白胨在0.34g/L含氮量下培养物的干重分别可达和2.78g/L2.70g/LDHA产量则以蛋白胨培养为最高为

6、-+338.56mg/L采用硝酸铵培养至收获时我们检测培养液中NO3和NH4浓度发现其-+NO3已消耗完而NH4浓度维持培养开始时的浓度这可能是隐甲藻体内缺乏同化利用+NH4的酶类故只能利用硝酸盐从图3可以看出不同氮源培养隐甲藻藻体内脂质含量及DHA含量均有一定的差异蛋白胨培养藻体内的脂质含量最高达339.58mg/g硝酸钠培养藻体内DHA含量最高达20海洋通报卷203503DHA产量300生物量2.525022001.5150生物量(g/L)DHA产量(mg/L)11000.55000胰蛋白胨蛋白胨硝酸钾硝酸钠硝酸铵尿素图2不同氮源对C.cohniiATCC30556生

7、物量及DHA产量的影响450170脂质含量DHA含量400150350130300110脂质含量(mg/g)DHA含量(mg/g)250902007015050胰蛋白胨蛋白胨硝酸钾硝酸钠硝酸铵尿素图3不同氮源对C.cohniiATCC30556DHA和脂质含量的影响153.81mg/g由图3可见有机氮源对隐甲藻脂质积累比较有利用胰蛋白胨和蛋白胨培养藻体内脂质含量均高于无机氮源培养总的来看采用单一氮源培养除胰蛋白胨外用蛋白胨培养隐甲藻藻体生物量和DHA产量均较高而硝酸钾亦可使隐甲藻生长良好有利于DHA累积考虑到隐甲藻的营养要求及