扫描电镜细胞样品制备方法的改进.pdf

《扫描电镜细胞样品制备方法的改进.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、电子显微学报J.C1in.Electr.MicrOsc.SOc.2（26）1671~6722003年671扫描电镜细胞样品制备方法的改进黄晓红，张奇亚（中国科学院水生生物研究所，淡水生态与生物技术国家重点实验室，湖北武汉430072）扫描电镜已广泛用于对细胞表面结构的观察，胞超快扫描电镜样品制备中，还有另一种方案。在但在细胞样品制备过程中，往往因脱水或干燥引起制备高等植物的扫描电镜样品时，建立了全程序微细胞体积或表面结构的改变，导致观察结果出现误波辐射法，其方法与上述方法不同之处在于植物样差或失真。为了避免这类问题，我们以鱼类培养细品的干燥也是借助微波，

2、利用微波炉解冻档，起始温胞为材料，对其扫描电镜样品制备技术进行了一些度为60C，终止温度7013C，干燥3~4min。改进，举例如下。"单固定氯化金染色法!单固定半程序微波辐射法对生物样品而言，氯化金有良好的导电性，但没微波辐射可应用于扫描电镜细胞样品的制备。有固定作用，使其在扫描电镜样品制备中的应用受经微波辐射处理浸泡过的小鼠肝、肾组织及植物样到限制。但利用氯化金代替锇酸，制备扫描电镜和品等，表明低温间歇微波辐射不会使样品产生严重透射电镜样品，观察结果显示其图像质量符合要求。损伤。实验结果显示，微波辐射不仅可以缩短制样用氯化金替代锇酸，对贴壁培养的细胞

3、进行制样，其时间，还可以减少对细胞样品表面结构的损伤。为具体步骤为：①固定：2.5%戊二醛固定21。②前漂了寻找更适用于鱼类培养细胞处理的方法，在已有洗：0.1mOl/L磷酸缓冲液漂洗二次，每次10min。③工作的基础上，我们作了些改进，如未用锇酸固定，后漂洗：双蒸水漂洗3次，每次10min。④浸渍染色：降低了制样成本；同时进一步缩短辐射时间，将整个2%氯化金两次，每次1.51。⑤前漂洗：0.1mOl/L磷制样过程从约91缩短为约21，尽量避免或减少细酸缓冲液漂洗2次，每次10min。③后漂洗：双蒸水胞样品受损。漂洗3次，每次10min。①脱水：乙醇逐级

4、脱水，依次处理鱼类培养细胞的过程是先将一直径为为50%，70%，90%，100%，100%，每次10min。③置15cm、内盛200ml水的培养皿置于微波炉（型号换：纯乙酸异戊酯置换20min或过夜。②干燥：CO2MICROWAVEOVEN-D3OD，工作频率2450Mhz）内，临界点干燥。先用低档微波辐射8min预热，用温度计测水温，起注：配制2%的氯化金时，用双蒸水配制为宜，始温度约为20C，使终止温度为3015C。如果温不宜使用缓冲液。度超过35C，则加冷水降温。随后将装有样品和浸#单固定快速脱水法泡液的小瓶放于培养皿内，再继续用微波处理一般认为在

5、制备易损样品（菌类和纤毛）时，可2min，并使样品保持在35C环境中。除干燥外，固采用戊二醛单固定，但要根据不同的情况，选择脱水定、脱水、置换均在炉内进行。具体步骤为：①前固时间。常规方法是戊二醛和锇酸双固定后，起始用定：在装有样品的小瓶中加入适量的2.5%的戊二50%乙醇脱水，脱水时间为10min。考虑到70%的醛，一般为样品的10倍。微波辐射5min，炉外原液乙醇通常用来暂存样品，因此选择70%的乙醇为起停留30min。②漂洗：每次微波辐射2min，炉外原液始浓度，比较了对植物样品分别脱水5min和2min停留5min。③脱水：乙醇逐级脱水，依次为：

6、50%，的效果。结果显示脱水5min较2min制样效果要70%，90%，100%。每次微波辐射2min，炉外原液停好，表明脱水时间不宜太短。我们参照该方法，在改留5min。④置换：纯乙酸异戊酯溶液置换三次，每变了固定液中戊二醛的浓度的同时，采用初级脱水次微波辐射2min，炉外原液停留5min。⑤干燥：CO2液为70%乙醇、脱水时间为5min和2min，对贴壁培临界点干燥。养的动物细胞也进行了制样和观察比较，得到相同该方法对于贴壁培养的细胞较适用。在游离细结果。操作程序为：①固定：2.5%戊二醛固定基金项目：国家自然科学基金资助项目（30170726），8

7、63计划（2001AA626030和2002AA626010）），中国科学院及其水生生物研究所院创新项目（KSCX2-SW-302和220313）.电子显微学报J.Chin.Electr.Microsc.Soc.6722（26）1671~6722003年30min；!脱水：乙醇逐级脱水，依次为：70%，90%，Smin；#干燥：CO2临界点干燥。总之，对于不同的100%，100%，每次Smin；"置换：纯乙酸异戊酯置换样品要采用合适的方法，才能得到理想的效果。!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!离子薄化器制造

8、厂家消息沈阳广元科仪真空技术有限责任公司生产新型离子薄化器。双、单溅射室两种结构