脆性组氨酸三聚体基因在舌鳞状细胞癌中的表达及意义.doc

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1、脆性组氨酸三聚体基因在舌鳞状细胞癌中的表达及意义作者：张英怀，王洁，董福生，谷建琦【摘要】目的探讨脆性组氮酸三聚体基因在舌鳞状细胞癌屮的表达及其意义。方法应用免疫组化SP法检测30例舌鳞状细胞癌和12例正常舌粘膜鳞状上皮组织中FHIT的表达情况。结果舌鳞状细胞癌组织中FHTT的阳性率(40.0%)显著低于正常舌粘膜组织(75.0%)(P<0.05)oFHIT的表达与年龄、性别无关(P>:0.05),而与分化程度相关，分化程度越低，FHIT的失表达越明显(P<0.05)o结论FHTT可能在舌癌的发生发展中发挥重要作用。【关键词】脆性组

2、氨酸三聚体；免疫组织化学；基因；舌癌TheExpressionandSignificanceofFHTTinSquamousCellCarcinoiriaofTongueKeywords:Fragi1ehistidinetriad；Tmniunohistochemistry；Gene；Tonguecancer舌鳞状细胞癌是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤，其恶性程度高,预后差，发病机制仍不清楚。脆性组氨酸三聚体(Fragi1ehistidinetriad,FHTT)基因是1996年分离出来的新的候选抑癌基因。许多研究都表明FHIT基因的缺失与众多肿瘤的发

3、生发展密切相关。但FHIT和舌鳞状细胞癌的关系等相关研究国内鲜见报道，国外亦不多见。本研究采用免疫组化方法研究舌鳞状细胞癌中FHIT的表达及意义，探讨FHIT在舌鳞状细胞癌发生中的作用。1资料与方法1.1资料收集河北医科大学附属第二医院1991〜2004年手术切除的舌鳞状细胞癌石蜡包埋组织标本30例。由2位高年病理医师复查全部病例所有病理切片，按WHO标准核实诊断，全部病例均为鳞状细胞癌，高分化癌17例，中分化癌7例，低分化癌6例。30例舌鳞状细胞癌患者中男19例，女11例，年龄28〜79岁，平均年龄55.10岁；所有患者术前未经放疗及化疗。另外，

4、取12例正常舌粘膜组织作为对照，其屮男9例，女3例,年龄19〜67岁，平均年龄44.17岁。正常组织均取自囊肿等良性肿瘤旁的正常舌粘膜，经病理证实为正常鳞状上皮组织。1・2试剂兔抗人FHIT多克隆抗体浓缩液，使用浓度1：75,二抗及SP免疫组化试剂盒，DAB显色剂，多聚赖氨酸防脱片剂均购自北京屮山生物技术有限公司。1・3对照实验用已知FHIT阳性的正常乳腺标本作为阳性对照。以PBS代替一抗作为阴性对照。1・4实验方法采用免疫组织化学SP法（过氧化物酶标记的链酶卵白素法）。所有标本均经10%甲醛固定，石蜡重新包埋后，将每个蜡块切为4〜的切片，共切3张

5、，1张FHIT染色，1张HE染色，1张作为阴性对照。石蜡切片常规脱蜡至水；3%H202甲醇振洗25min,微波抗原修复，92°C~98°CX15min,正常山羊血清封闭,37°C孵育30min,滴加一抗,4°C过夜；滴加生物索化二抗。以上步骤均严格按照试剂盒要求操作。1・5结果判定FHIT阳性结果判定：以细胞核或浆内出现棕黄色颗粒者为阳性，结果评定参照VanHeer'den[l]标准，采用半定量积分法，即对每张切片的染色强度和染色范围分别进行分级计分，然后根据二者之积确定其阳性强度。染色强度为无染色或弱染色计为1分，中等强度计为2分，强染色计为3分

6、;染色范围以阳性细胞率计分：＜10%为1分，10%〜50%为2分，＞50%为3分。二者得分计为1〜9,W3分为不表达或弱表达（一），＞3分为中等或高表达（+）。1.6统计分析用SPSS11.5统计软件进行统计分析，免疫组化结果用X2检验，出现小值频数时，采用Fisher精确概率法。P＜0.05有统计学意义。2结果2.1FHIT蛋口在正常舌粘膜组织和舌鳞状细胞癌组织中的表达在正常舌粘膜组织中，FHIT蛋白的表达主要位于基底细胞层和棘层，也有少部分粒层出现FHIT蛋白的表达，呈棕黄色颗粒染色，且大多为强阳性染色，阳性细胞以上皮基底层较为密集，细胞核和细

7、胞浆均有着色。在舌癌组织中FHIT蛋口的表达主要位于癌细胞的胞浆，呈黄色颗粒染色。FHTT蛋白在舌鳞状细胞癌组织中的中等及高表达率为40.0%,明显低于对照组正常舌粘膜鳞状上皮组织(75.0%,05)，见表1。2.2FHTT蛋白的表达与临床病理学特征的关系FHTT蛋白的表达与患者的性别、年龄无明显的相关性(P>0.05)，而与肿瘤的分化程度相关，分化程度越低，FHIT蛋白的表达缺失越明显(P<0.05),见表2。表1FHIT蛋白在正常舌粘膜组织表2舌鳞状细胞癌FHTT蛋白的表达3讨论FHIT是1996年Ohta等用外显子捕获方法获得的新

8、的候选抑癌基因，定位于染色体3pl4.2,因其含有脆性位点FRA3B,具有不稳定性,故命名为脆性组氨酸三聚体。它是组氨酸三