脆性组氨酸三聚体基因在舌鳞状细胞癌中的表达及意义论文

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1、脆性组氨酸三聚体基因在舌鳞状细胞癌中的表达及意义论文张英怀,王洁,董福生，谷建琦【摘要】目的探讨脆性组氨酸三聚体基因在舌鳞状细胞癌中的表达及其意义。方法应用免疫组化SP法检测30例舌鳞状细胞癌和12例正常舌粘膜鳞状上皮组织中FHIT的表达情况。结果舌鳞状细胞癌组织中FHIT的阳性率（40.0%）显著低于正常舌粘膜组织（75.0%）（P0.05）。FHIT的表达与年龄、性别无关(P0.05)，而与分化程度相关，分化程度越低，FHIT的失表达越明显(P0.05)。结论FHIT可能在舌癌的发生发展中发挥重要作用。【关键词】脆

2、性组氨酸三聚体；免疫组织化学；基因；舌癌TheExpressionandSignificanceofFHITinSquamousCellCarcinomaofTongueKeymunohistochemistry；Gene；Tonguecancer舌鳞状细胞癌是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤，其恶性程度高，预后差，发病机制仍不清楚。脆性组氨酸三聚体(Fragilehistidinetriad.freel的切片，共切3张，1张FHIT染色，1张HE染色，1张作为阴性对照。石蜡切片常规脱蜡至水；3%H2O2甲醇振洗25min，

3、微波抗原修复，92℃～98℃×15min，正常山羊血清封闭，37℃孵育30min，滴加一抗，4℃过夜；滴加生物素化二抗。以上步骤均严格按照试剂盒要求操作。1.5结果判定FHIT阳性结果判定：以细胞核或浆内出现棕黄色颗粒者为阳性，结果评定参照VanHeerden1标准，采用半定量积分法，即对每张切片的染色强度和染色范围分别进行分级计分，然后根据二者之积确定其阳性强度。染色强度为无染色或弱染色计为1分，中等强度计为2分，强染色计为3分；染色范围以阳性细胞率计分：＜10%为1分，10%～50%为2分，＞50%为3分。二者得分

4、计为1～9，≤3分为不表达或弱表达（－），＞3分为中等或高表达（+）。1.6统计分析用SPSS11.5统计软件进行统计分析，免疫组化结果用χ2检验，出现小值频数时，采用Fisher精确概率法。P＜0.05有统计学意义。2结果2.1FHIT蛋白在正常舌粘膜组织和舌鳞状细胞癌组织中的表达在正常舌粘膜组织中，FHIT蛋白的表达主要位于基底细胞层和棘层，也有少部分粒层出现FHIT蛋白的表达，呈棕黄色颗粒染色，且大多为强阳性染色，阳性细胞以上皮基底层较为密集，细胞核和细胞浆均有着色。在舌癌组织中FHIT蛋白的表达主要位于癌细胞的

5、胞浆，呈黄色颗粒染色。FHIT蛋白在舌鳞状细胞癌组织中的中等及高表达率为40.0%，明显低于对照组正常舌粘膜鳞状上皮组织（75.0%，P0.05），见表1。2.2FHIT蛋白的表达与临床病理学特征的关系FHIT蛋白的表达与患者的性别、年龄无明显的相关性（P0.05），而与肿瘤的分化程度相关，分化程度越低，FHIT蛋白的表达缺失越明显（P0.05），见表2。表1FHIT蛋白在正常舌粘膜组织表2舌鳞状细胞癌FHIT蛋白的表达3讨论FHIT是1996年Ohta等用外显子捕获方法获得的新的候选抑癌基因，定位于染色体3p14.2

6、，因其含有脆性位点FRA3B，具有不稳定性，故命名为脆性组氨酸三聚体。它是组氨酸三聚体基因家族的成员之一，含有10个外显子，其中外显子5～9组成开放阅读框架（ORF），编码147个氨基酸16.8KD的蛋白。FHIT蛋白是一种典型的二腺苷三磷酸(Ap3A)水解酶，可水解ApnA(n=3～6)成为ADP和AMP，Mn2+和Mg2+可刺激其活性，而Zn2+可抑制其活性。许多研究表明，在生理状态下，FHIT基因存在于大多数正常组织，而在多种肿瘤组织中如头颈癌、食管癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌等都有不同程度的减少甚至缺失，并发

7、现与FHIT基因转录及缺失有关，包括等位基因的缺失、基因重排以及细胞基因的异常。有学者认为在人上皮性癌细胞中普遍存在FHIT基因杂合子和/或纯合子的缺失2。FHIT基因失活尤其发生在那些暴露于致癌环境而形成的上皮性来源的肿瘤中。本研究发现FHIT蛋白在正常舌粘膜的阳性表达率为75.0%，而且多为强阳性。在舌鳞状细胞癌中有60.0%存在FHIT蛋白的减少或缺失，这与以往口腔鳞状细胞癌的研究结果基本一致37。有研究发现，FHIT基因的低表达随着肿瘤分化程度的降低和淋巴结转移有增强趋势。也有研究表明，FHIT的表达与组织学

8、分级及肿瘤的增殖活性成负相关，并且FHIT表达丢失的患者趋向于不良预后，即与短期生存率有关8。Lee等3对41例舌鳞状细胞癌标本的研究显示28例出现FHIT表达缺失（68%），而且FHIT表达缺失与疾病自然存活时间的长短呈显著相关性，与肿瘤大小和疾病所处阶段有关。本研究发现FHIT的失表达与舌鳞状细胞癌的病理学分级具有相关性(P＜