大米抗氧化活性肽的分离纯化和性质研究.pdf

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1、StudyOilSeperationandPurificationofRiceAntioxidantivePeptidesanditsPropertiesSHENYanhaoAthesissubmittedinpartialsatisfactionoftheRequirementsforthedegreeofMasterofSciencemFoodScienceinCentralSouthUniversityofForestryandTechnology498ShaoshanSouthRoad，TianxinDistric

2、tChangshaHunan410004，P．R．CHINASupervisorProfessorLIUFangMay,2011中南林业科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品，也不包含为获得中南林业科技大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式表明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：q弭)亍豪3

3、-ol1年6月2日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件或电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权中南林业科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。(翟嚣≯翩徘“／】芳作者签名。申匆亍裹剔磁名．∥Jr／2们f年石月上日珏H年厶a日摘要自从Harman提出自由基理论以来，人们认识到人体内氧化产生的自由基与人体衰老和许多疾病有关，因此人们越来越关注抗氧化剂。但目前

4、大多数抗氧化剂都是化学合成物，如叔丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)；这些化学类抗氧化剂虽然效果好，但是对人体具有潜在毒性。近年来，人们把目光转到天然性的抗氧化剂，如抗坏血酸、a．生育酚、茶多酚、大豆蛋白酶解得到的大豆肽等。近年来研究发现，大米源抗氧化活性肽(antixox．idativepeptide)也具有较强的抑制生物大分子过氧化和清除体内自由基的功能，而且这些抗氧化活性肽往往强于蛋白质和氨基酸，并且具有低毒、高效等特点，有望利用这些抗氧化活性肽开发新功能食品和保健品。本文对大米抗氧化活性肽的制备工艺

5、进行了优化，通过响应面分析法优化了超声波处理工艺参数的最佳组合；通过不同的体外体系，研究大米碱性蛋白酶酶解产物的抗氧化活性，然后进一步分离和纯化，得到了几段抗氧化活性高的片段；并通过体外模拟人体消化，评价分析了消化对大米抗氧化活性肽抗氧化活性的影响。现将主要结果和结论归纳如下：1、选取超声功率、超声处理时间、超声处理初始温度做3因素3水平响应面分析实验，采用SAS程序对实验数据进行回归分析，得出模型中最佳提取工艺参数：超声功率1750W、超声处理时间30min、超声处理初始温度40℃，其DPPH·清除率预测可达到78．2％

6、。对以上工艺参数进行验证实验，经3次平行测定，各抗氧化肽的DPPH·清除率分别为：76．0％、75．8％和77．4％，此时抗氧化肽的浓度分别为1．5037、1．5163和1．5085mg／mL，DPPH·清除率的平均值为76．4％，抗氧化肽的平均浓度为1．5095mg／mL，实验结果较理想。在优化工艺条件下，抗氧化肽得率由31．6％提高到42．2％。2、本章采用了5种抗氧化活性检测的方法，其中包含了脂类物质氧化抑制能力的方法、清除自由基能力的方法和还原能力的测定方法，较全面地反映了大米多肽的抗氧化能力。并和Ve的抗氧化能力

7、做了比较，在高浓度20．00"-50．00mg／mL，大米多肽和Ve对·OH清除能力相当，但是在其他浓度和清除其他自由基的情况时，大米多肽的能力都低于Ve。总的来说，大米多肽的抗氧化能力在一定范围内，与浓度呈一定的量效比。3、使用葡聚糖凝胶SephadexG．25初步分离纯化后，发现分子量在132．7～1153．9的小肽占得相当大的比例，为下一步纯化分离打下了基础。4、利用SP。SephadexC．25作为离子交换层析介质，pH4．0，0．02mol／LHAe．NaAe为起始缓冲液，流速120mL／h，NaCI(0"--l

8、mol／L)梯度洗脱，大米碱性蛋白酶水解产物NHREP得到了较好的分离，混合肽组分被分离出七个组分(A．G)，组分F的DPPH·清除能力最强(80．094-1．22％)。5、利用SephadexG．15凝胶色谱又将组分F分成了4个组分F1、F2、F3和F4。并分别检测了各组分的DPPH·清除能力。结果发