中华真地鳖抗氧化活性肽的分离及鉴定.pdf

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1、Separati,1。IdentifiiISeparatmnandldentificationof——AntioxidantPeptidesfromThesissubmittedtoupolyphagaO@'ngdaoAgr／culturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeof—MasterofEngineering，一1●一WangMaocun(DepartmentofFoodScienceandEngineering)Su[P‘MCupervlsor：iaoeizi‘rQingdao．ChinaJun

2、e，2012学位论文独创性声明IIHIHHIIIIIIIUllIIIIIIIHfY2332390本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。如不实，本人负全部责任。学位论文作者签名：鳓签字日期：狒年莎月四日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学

3、位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者虢王黼翩踪签字目期：加7L年占月≥分日签字日期：汐肛年易月巾乙嘭青岛农业人学硕十学位论文摘要中华真地鳖抗氧化活性肽的分离及鉴定摘要地鳖虫是一种传统的中药材，具有散淤血、解凝活血、接骨续筋、消肿止痛等功效。现代研究发现，地鳖虫还有调节血脂、溶血栓、抗肿瘤、免疫调节、抗氧化、抑制乙酰胆碱酯酶活性等功效。中华真地鳖(EupotyphagasinensisWalker)是地鳖虫中药食兼用的一个种，干品蛋白质含量高达60％vR上，氨基酸

4、种类齐全，并且含有丰富的脂肪酸和微量矿物质元素。随着人们对中华真地鳖药用价值和营养价值的认识，其养殖规模不断扩大，成为农民增收的新途径。但是其利用还停留在全虫入药或油炸地鳖、地鳖浸泡酒等传统方式，这些不能满足现代社会不同层次的消费要求，并制约着中华真地鳖产业的发展。高蛋白的中华真地鳖是生物活性肽的优良原料，将其精ho-Y--成具有高附加值的生物活性肽，可以丰富抗氧化肽的种类，发展中华真地鳖产业。本文以中华真地鳖为研究对象，经脱脂、酶解、超滤后得中华真地鳖酶解物，研究其体外、体内抗氧化活性。并采用阴离子交换层析、凝胶层析、反相高效液相、质谱等方法，对活性较高组分进行分离纯化和

5、氨基酸序列鉴定。结果如下：1．采用从蜘蛛肠道分离的Arazyme蛋白酶酶解中华真地鳖蛋白，将酶解物超滤、冷冻干燥后得到中华真地鳖酶解物。研究其自由基清除能力、还原能力和对脂质过氧化的抑制能力。结果表明，其对二苯代苦味酰基自由基(DPPH．)、羟自由基(．OH)和超氧阴离子自由基(02。．)均有较强的清除能力，IC50分别为1．32、0．40和8．73mg／mL；肽含量为1．8mg／mL时，还原能力达0．3152；向亚油酸自氧化体系中加入含2mg多肽的酶解物后，其对亚油酸自氧化反应的抑制率达88％，效果好于2mg的d．生育酚。说明中华真地鳖酶解物具有较强的体外抗氧化活性。2．

6、j奇中华真地鳖酶解物灌胃D．半乳糖致衰老小鼠，测定小鼠血浆和肝脏组织中丙二醛(MDA)含量、．OH清除能力以及总过氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物(GSH．Px)、过氧化氢酶(CAT)活力，结果显示，与模型组相比，小鼠血浆和肝脏组织匀浆中MDA含量极显著(P<0．01)降低，对．OH的清除能力显著(P<0．05)增强，其T-SOD(P<0．05)、GSH．PX(P<0．01)和CAT(P<0．05)活力显著升高。说明中华真地鳖酶解物能显著抑制D．半乳糖致衰老小鼠的衰老。3．将中华真地鳖酶解液在4。C放置12h，分为沉淀(F1)和上清液(F2)两部分。利用RP．H

7、PLC对Fl进行分离，得到纯度较高的组分F1．1，其浓度在1009m／mL时对DPPH．的清除率为53．30％。经鉴定其分子量为335．03，氨基酸序列为天冬氨酸．缬氨酸．半胱氨青岛农业大学硕士学位论文摘要酸(Asp—Val—Cys)；利用DEAE—SephadexA·50离子交换层析、SephadexG一15凝胶以及RP．HPLC对中华真地鳖多肽F2进行分离。阴离子分离得到3个组分，组分F2．2对DPPH．、·OH和02’．的清除能力最强，IC50分别为1．09、0．27和5．98mg／mL；凝胶分离F2．2得到