离子束辅助农杆菌介导抗赤霉病基因tri101转化小麦成熟胚的初步研究.pdf

《离子束辅助农杆菌介导抗赤霉病基因tri101转化小麦成熟胚的初步研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterThePreliminaryStudyofIonBeamAssistingAgrobacterium—mediatedTransformingWheatmatureEmbryosWithGene打i101ByZhenqiangPeiSupervisor：Prof．BaomingTianProf．ZhenshengLei，弋·oUeneucsBioengineeringDepartmentMay2011原创性声明本人郑重声明：所呈交的学

2、位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：靼掘嗽同期：y-f年‘月岁日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他

3、复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：蓥谁沲同期：7yoI(年‘月3邑摘要小麦是我国的主要粮食作物，它不仪是人类的重要食物来源，还是畜牧业中饲料的重要来源，另外它还是许多轻工业产品的重要原料。然而赤霉病等小麦病害，哐重影响小麦的产量和品质，给农业生产和人民生活带来巨大的损害。赤霉病产生的DON毒索还危及人类食品和动物饲料的安全，对人类和动物的身体健康造成危害。tril01基因是降解赤霉病菌毒素的一个主要结构基因，它在植物中的表达不仅可以降

4、低赤霉病的发病率，还能减少真菌毒素的积累，从而降低赤霉病对小麦产量和品质的影响。通过基因工程的方法，使tril01基因在小麦中高效表达，可以提高小麦抗病功能，减轻赤霉病毒素对小麦生长的危害，有望增加小麦的产量和质霞，创育出超高产的小麦品种。本研究将降解赤霉病菌毒紊基因tril01基因与pCAMBIAl304载体融合，构建了小麦转化载体pCAMBIAI304一tril01并转化小麦，以期该基因在小麦里特异表达，从而提高小麦抗病功能，减轻赤霉病毒素对小麦生长的危害。同时，我们选择一个比较新的植物转基冈方法一离子束介导法，并探讨了真空处理和离子剂景这两个重要因素对小麦出苗率和种子

5、活力的影响，以期探索一种更完善、快捷的转基因方法，为植物遗传转化和新品种改良提供帮助。现将本研究的主要结果报道如下：1．／J、麦转化表达载体的构建将降解赤霉病菌毒素基闪tril01基因与pCAMBIAl304载体融合，构建了小麦转化表达载体pCAMBIAl304．trilOl。采用冻融法将构建好的植物表达载体成功转入农杆菌菌株LBA4404。2．不同离子注入参数对小麦出苘的影响研究探讨了真空处理和离子剂量这两个重要因素对小麦出苗率和种子活力的影响，发现真空处理对小麦出苗率和种子活力影响均不大，离子剂量对出凿率的影响明显，低剂量的处理对种予出苗率影响较小，随着剂量增加，出苗率

6、程直线F降。通过比较，得到适合进行小麦展W转化的最佳参数：真空度lOo～10‘2pa、能量30kev、束流200mA、脉宽400ps、频率25Hz、剂量为8x1017N+／cm2，真空处理时问2～3h。3．离子束介导驴i101基因转化小麦摘要使用离子束对小麦胚部进行照射处理，然后通过农杆菌侵染将外源基因tril01整合到小麦细胞中。对侵染后的小麦进行土培法和组培法两个处理，经Gus组织化学染色和PCR检测，在20000粒进行土培法处理的种子中得到22株部分叶片或根部转化成功的植株，转化率为0．11％；在5000粒进行组培法处理的种子中得到2株转化成功的植株，转化率为0．04

7、％。证明利用离子束辅助农杆菌介导法转移外源基因是可行的，但是在转化过程中仍有一些问题需要解决。关键词：小麦；成熟胚；离子束；tril01基因；赤霉病AbstractWheatisthemainfoodcropsinChina,Itisnotonlythehumantoprovideimportantsourceoffood，butalsoanimportantsourceofinlivestockfeed，andItisalsoanimportantrawmaterialofmanylightindustrialp