DB22∕T 973-2019 猪霉形体肺炎检测 ELISA法.pdf

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1、ICS11.220B41DB22吉林省地方标准本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T973—2019代替DB22/T973-2002猪霉形体肺炎检测ELISA法DetectionofSwineenzooticpneumoniaebyenzyme-linkedimmunosorbentassay本标准仅供内部使用不得翻印method2019-07-25发布2019-08-15实施吉林省市场监督管理厅发布本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T973—2019本标准仅供内部使用不得翻印前言

2、本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。本标准代替DB22/T973-2002《猪霉形体肺炎微量全血—酶联免疫吸附试验诊断技术规程》，与DB22/T973-2002相比，除编辑性修改外，主要技术变化如下：——名称变更；——增加了“规范性引用文件”（见2）；——修改了“原理”（见3，2002年版的2）；——修改“试剂”为“试剂或材料”（见4，2002年版的4）；——修改“仪器和材料”为“仪器设备”（见5，2002年版的3）；——增加了“样品”（见6）；——修改了“操作

3、步骤”为“试验步骤”（见7，2002年版的5）；——修改了“结果判定”（见8，2002年版的6）；——增加了“附录A”（见附录A）。本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。本标准起草单位：吉林省畜牧兽医科学研究院。本标准仅供内部使用不得翻印本标准主要起草人：程荣华、邵洪泽、呼延含蓉、郭衍冰、丁世杰、李昱洁、尹德福、孙艺学。DB22/T973-2002的历次版本发布情况为：——DB22/T973-2002。I本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T973—2019本标准仅供内部使用不得翻印

4、猪霉形体肺炎检测ELISA法1范围本标准规定了猪霉形体肺炎酶联免疫吸附试验（ELISA）的试剂或材料、仪器设备、样品、试验步骤和结果判定。本标准适用于猪霉形体肺炎的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理吸附于固相载体表面的抗原或抗体与被检标本中相应的抗体或抗原结合形成抗原抗体复合物，本标准仅供内部使用不得翻印再加入酶标记

5、的抗体（抗抗体），加入底物后，底物被酶催化成为有色产物，颜色反应的深浅与标本中相应抗原（抗体）的量呈正比，可根据呈色的深浅进行定性或定量检测。4试剂或材料4.1试剂除有特殊说明外，所有试验用试剂均为分析纯,试验用水符合GB/T6682中一级水的要求。4.1.1磷酸盐缓冲液（PBS）（见附录A）。4.1.2PBST（见附录A）。4.1.3猪肺炎霉形体可溶性抗原。4.1.4蒸馏水。4.1.5包被液（见附录A）。4.1.6封闭液（见附录A）。4.1.7猪霉形体肺炎阳性血清。4.1.8猪霉形体肺炎阴性血清。4.1.9

6、辣根过氧化物酶（HRP）标记兔抗猪IgG。4.1.10底物溶液（见附录A）或等效物。4.1.11终止液（见附录A）。4.2材料4.2.1采血针。4.2.2滤纸。1DB22/T973—20194.2.3离心管（1.5mL）。4.2.496孔酶标板。4.2.5封板膜。本标准仅供内部使用不得翻印4.2.6吸头（200μL,1000μL）。5仪器设备5.1多通道可调移液器（20μL〜200μL）、单通道可调移液器（20μL〜200μL,1000μL）。5.2恒温水浴箱37℃±0.2℃。5.3普通冰箱。5.4酶标仪测定

7、波长490nm。6样品6.1血样的采制猪耳静脉采血（4.2.1），用移液器（5.1）吸取（4.2.6）100μL血液于滤纸（4.2.2）上，注明耳号。自然风干，制成全血干纸片，置4℃（5.3）保存或送检。6.2血样的稀释将干纸片按血滴大小剪下，放入离心管（4.2.3）中，加入PBST（4.本标准仅供内部使用不得翻印1.2）2.5mL，置4℃冰箱过夜。7试验步骤7.1可溶性抗原可溶性抗原（4.1.3）加PBS（4.1.1）稀释到2.5mg/mL，充分振荡混匀。7.2包被抗原用包被液（4.1.5）稀释抗原至工作浓

8、度，加入酶标板（4.2.4），100μL/孔（每板2孔不加抗原，作为空白对照），用封板膜（4.2.5）密封酶标板，37℃（5.2）孵育1h，置4℃冰箱孵育12h〜14h或过夜。7.3洗板取出酶标板弃去板内液体。用PBST洗板3次〜5次，在最后一次洗涤后，将板孔内的残留液体在滤纸上拍干。7.4封闭全板加封闭液（4.1.6）200μL/孔，密封酶标板，置37℃孵育2h。7.5洗板按7.3操作。2DB22