猪肺炎霉形体培养技术简介

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1、猪肺炎霉形体培养技术简介来源:甘肃农业信息网

2、添加时间:2006年05月11日09:25:16猪肺炎霉形体(Mycop

3、asmaHyopneumoniae，Mhp)是猪地方性流行性肺炎(Swineenzooticpneumoniae，SEP，俗称猪喘气病)，又称猪支气管肺炎(Mycoplasmalpneumoniaeofsv~ne，MPS)的主要病原菌。该病是猪特有的一种接触性传染病，流行范围广，难以治愈，严重危害着世界养猪业的发展[1]。目前，国内外众多学者对霉形体的污染、预防和检测等方面都进行了大量的研究。猪肺炎霉形体(又叫猪肺炎支原体)为

4、专性需氧性，对营养要求较一般霉形体为高[2]。由于它的培养难度大，影响了其在遗传、生化和免疫等方面的研究。因此，国内外许多科研工作者通过长期研究，创造了许多类型的培养基，以便培养高效优质的菌体。但直到现在，人们对猪肺炎霉形体的培养及培养基，仍有许多缺点，而且每次培养的结果也不尽人意，为猪喘气病病原体的研究带来了很大困难。1霉形体的营养要求和培养基中的主要成分[3]霉形体虽然能够利用无细胞培养基中的营养合成自身生长繁殖所需物质，由于其基因组的分子量小，携带的信息量不多，生物合成能力有限，并且绝大多数霉形体基因组中的鸟嘌呤(guanine，G)十胞

5、嘧呤(cytidine，C)量局限在30mole％以下，更进一步限制了其信息含量。因此需要从体外摄取许多能通过细胞膜的比较复杂的大分子，例如胆固醇、脂肪酸、核酸前体以及维生素、氨基酸等物质，这就促使霉形体的培养基成分比细菌培养基成分复杂得多。另外，霉形体内能量供应机构效率不高，必须从体外摄取大量能源物质供之利用。霉形体对pH敏感，霉形体属的pH要求在7．0～8．0，温度36～38℃，否则会使发育停止。此外，为了维持环境中酸碱度相对稳定，常在培养基中增加缓冲物质。但是霉形体对渗透压十分敏感，环境中的渗透压应保持在10万～14万Pa,所以提供的缓冲

6、物质的浓度也应保持在一定限度内。根据霉形体的营养需要，霉形体的分离生长培养基中大都含有以下一些物质：1．1肉浸液：主要是牛心浸液，可为霉形体提供生长所需的多种营养成分，如胨、肽、氨基酸、核酸前体、维生素和无机盐类等。有的培基设计中使用牛心酶消化液。商品肉浸液常是脱水干粉型的，使用方便且能保证质量。专用于霉形体的国外成品培基主要有：(1)Bacto牛心浸液肉汤(Bacto—heartinfusionbroth，Difco)。其成分中含有牛心浸液、胰蛋白月示一(Bacto—Tryptose)和氯化钠。(2)Bacto脑心浸液(Bacto—brain

7、heartinfusion，Difco)。含有牛脑浸液、牛心浸液、月示蛋白胨(protecxsepeptone)、Bacto一葡萄糖、氯化钠和磷酸氢二钠。(3)pplo肉汤(pplobrothl~fco，dehydrated)。含有Bacto牛心浸液、Bacto一蛋白胨和氯化钠。Difco还生产一种含结晶紫的pplo肉汤(pplobrothwithCV)，用于污染严重的样品或受到细菌污染的霉形体琼脂培养物，它不用于正常培养基中。(4)霉形体肉汤基础(mycoplasmabrothbase，Oxoid)。其中含有细菌学蛋白胨(OxoidL34)、

8、牛肉浸粉(Lab—Lemco’Powder，OxoidL29)、氯化钠和矿物添加剂(mineralsuppJe—ment)。在BBL的牛心浸液肉汤(heartinfusionbroth，BBL)中还含有一些酵母水解物。1．2酵母浸液(yeastextract)：可以提供大量核酸、核酸前体、维生素、氨基酸以及一些生长因子。市售的干粉大都是酵解产物，许多实验室常以鲜面包酵母或啤酒酵母自制成鲜酵母提取物、鲜酵母自溶物(yeastautolysate)或酵母水解物(yeasthydrolysate)。1．3血清：血清主要给霉形体提供可吸收的无毒性脂肪酸

9、与胆固醇，尤其是胆固醇用于膜的合成。最常用的血清是马血清和猪血清，前者每100ml中含有胆固醇75mg，后者含有160mg。马血清用时一般不用56C30rain灭活，而猪血清一般要经过加温灭活。由于每个动物的血清支持霉形体生长的能力不同，因此在使用之前应对其支持霉形体发育的能力进行检测，质量不佳的绝不能使用。1．4蛋白胨(peptone)：一般地，由牛心浸出物和酵母提取物所提供的胨类和氨基酸类可满足霉形体的生长发育需要。，但对某些要求苛刻的霉形体常在培养基中加另外的蛋白胨，不同牌号的蛋白胨支持霉形体生长能力也不相同。常用的有：乳清蛋白水解物(1

10、actalbuminhydrolysate，Difco)、胰蛋白月示(tryptoseBBL)、胰胨(tryptoneOxoid)、蛋白胨(Difcx