毛细管电泳-安培检测法分离分析手性药物索他洛尔.pdf

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第12期2010年12月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1776—1780DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．01776毛细管电泳-安培检测法分离分析手性药物索他洛尔吴晓苹。陈小燕郑敏敏(食品安全分析与检测技术教育部重点实验室，福州大学化学化工学院，福州350108)摘要采用毛细管电泳．柱端喷壁式安培检测技术，建立了痕量手性药物索他洛尔的分离检测新方法。以1．5％(w／V)羧甲基毋-环糊精为手性选择试剂，借助于环糊精-客体包合物的拆分原理，索

2、他洛尔对映异构体在优化的分离条件：50mmoL／LTris·H3PO。缓冲液(pH5．5)，分离电压2lkV，进样条件18kV／10s，工作电位1150mV(vs．AS／AgCl)，可实现基线分离，线性范围为5-500¨g／L；异构体I和Ⅱ的检出限($／N=3)分别为2．0和1．9彬L。本方法用于模拟血清样品分析，结果令人满意。关键词毛细管电泳；安培检测；手性拆分；羧甲基哥环糊精；索他洛尔1引言索他洛尔(Sotal01)属于非选择性I口类届受体阻滞剂，在临床上最初用于治疗高血压，由于疗效突出，目前已成为室性抗心律失常的首选药物。索他洛尔结构中与苯

3、环相邻的碳为手性中心(图1)，有两种对映异构体，其口．受体阻断活性取决于(一)一索他洛尔对映异构体。(+)．索他洛尔虽无阻滞活性，临床可用于禁用口．受体阻滞剂的患者【lJ。索他洛尔对映异构体之间具有完全不同的药效学和立体选择性作用机理，实际消旋体给药时的个体差异较大，体内代谢途径也存在差异，建立快速灵敏的索他洛尔对映异构体选择性分离分析方法，将有利于药物动力学、药效学研究和手性药物质量控制。HPLC是目前口．受体阻滞剂手性分离的主要方法旧“J，如Badaloni等【31采用电喷射质谱与手性固定相色谱分离人体血浆中索他洛尔，灵敏度很高(LOD为4斗

4、∥L)。但该法样品消耗量、前处理、手性固定相种类成本以及溶剂环保性等方面存在不足。相比之下，毛细管电泳方法简单、高效、环保，无需手性固定相，分离模式和手性选择剂多，被认为是分离对映异构体最成功有效的技术之一。目前已有CE—UV分析手性口．受体阻断剂的报道"’6J，但灵敏度较低，难以适应药代学和药效学研究需要。安培检测法(AD)具有灵敏度高、选择性好和低成本等特点，与CE联用能实现高效分离分析¨’。本研究采用CE．AD法，以羧甲基-口．环糊精为手性试剂，建立了索他洛尔对映异构体的手性拆分方法，并用于模拟血清样品分析。2实验部分2．1仪器与试剂自组装

5、的毛细管电泳一安培检测装置【81；4-30kV／0．3mA无极可调高压电源(上海原子核研究所)，进样端加正电压，输出端加负电压；未涂层石英毛细管(65cm×25斗mi．d．，河北永年光导纤维厂)；三电极系统(①300p,m微石墨圆盘为工作电极，Pt丝为辅助电极，A∥A蚂l(饱和KCl)为参比电极)；BASLC-4C型安培检测器(BioanalyticalSystem，WestLafayefleIn．，USA)；HW-2000色谱数据工作站(南京千谱软件有限公司)。每次实验前，电极在抛光布上用A1：0，悬浊液(0．03I．Lm，Buehler公司)

6、抛光，纯水洗净。CHI660A电化学工作站(上海辰华仪器有限公司)。2010-05—14收稿；2010-07-09接受本文系教育部新世纪优秀人才支持计划(No．NECT．06m572)和福建省高等学校新世纪人才项目(No．HX-2006．-99)资助●E-mail：wapple@fzu．edu．cn第12期吴晓苹等：毛细管电泳一安培检测法分离分析手性药物索他洛尔1777索他洛尔标准品(中国药品生物制品检定所)；卢一环糊精(卢．CD)、y．环糊精(y．CD)(纯度99％，Beckman公司)；羧甲基毋-环糊精(CM-／3一CD)均为分析纯(中国医药

7、集团四川抗菌素工业研究所，随机取代)。其它试剂均为分析纯，使用前未进一步纯化。50mmol／LTfis—H，PO。缓冲液(pH5．5)；实验用水为Milli-Q超纯水。2．2实验方法2．2．1样品溶液的处理将外消旋索他洛尔标准物质用二次蒸馏水配制成1g／L的储备液，4℃避光保存。取新鲜健康人血清样品(南京军区福州总医院)，分别添加上储备液，制得含5，50和500肛g／L索他洛尔的系列模拟人血清样品。取250¨L模拟人血清样品，加入250斗L乙醇，以4000r／min离心20min，去除蛋白，重复数次，至上清液中无明显的乳白色沉淀。混合上清液，用氮

8、气吹干得供试样品。将供试样品用250斗L水稀释即得待测样品液，用0．22斗m滤膜过滤后，进行电泳分析。2．2．2电泳条件每日实验前，毛细