死活细胞鉴定.doc

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1、死活细胞鉴定生物探究活动——鉴定植物细胞的死活【实验目的】学习川质壁分离法和川活体染色法鉴定细胞死活【实验原理】活细胞的原生质层具有选择透过性；而死细胞则为金透性。选择透过性是质壁分离的先决条件。因此能发生质壁分离的细胞就表示是活的，不能发生质壁分离的细胞则说明是死的。死活细胞间不仅通透性不同，而pH值等情况也不同，它们对某些染料的反应明显不同。某些染料能在活细胞的细胞液中积累，但不能染活的原生质；另一方而，这些染料可使死细胞的结构染色，但不积累于液泡。所以对根据某些染料活体染色的情况来鉴定细胞死活。【实验材料和用具】洋葱及其它植物材料、酒精灯、显微镜、刀片、锻了、载玻片、盖玻片、1M蔗糖溶

2、液、0.01%中性红溶液等。【实验步骤】1、用质壁分离的方法鉴定细胞的死活。撕洋葱农皮细胞滴加1M蔗糖溶液，在显微镜下观察。细胞很快发生质壁分离，这就是细胞活着的证据。另把制収的同样制片，用冷冻、加热、干燥、酒精浸泡等方法将它们的细胞杀死，然后取代上述活材料，做质壁分离实验，结果看到U死的细胞不能发生质壁分离现象。用床索、硝酸钾、氯化钙溶液等来代替蔗糖溶液，能快速鉴定细胞的死活。2、用活体染色的方法的鉴左细胞的死活。取洋葱或其它材料，用银子撕下表皮（如表皮不易撕下，也町在水中用锋利的刀片轻轻刮去多余部分），或用刀片做成切片若干，将表皮或切片浸入屮性红溶液屮，放置5-10分钟最后用清水浸洗后置

3、于载玻片上，加盖玻片，在显微镜下观察。活细胞的液泡内染成红色至紫色，原生质不染色，死细胞常呈橙红色，原生质和细胞核被染色。撕破的细胞，只剩细胞壁时，呈淡红色或淡紫色。为进一步鉴别细胞的死活，可把玻片上的水溶液吸去，滴一滴1M蔗糖溶液，便可观察到活细胞能发生质壁分离，死细胞及只剩细胞壁的空细胞都有没有这种现象。可用加热、冷冻或其它方法杀死植物组织，然后用上而所述方法进行处理，比较与活组织有何不同。注：1台盼蓝，又称锥蓝，是一种阴离子型染料，不能透过完整的细胞膜。是一种低毒的活体染色剂，它只能透过质膜受损的细胞或死细胞，而止常的细胞能加以排除，即：死细胞着色而活细胞不着色。故用于死活细胞的鉴定。

4、甲基蓝有类似的染色机理.2死活细胞在代谢上的差异：是采用美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。美蓝是一种无毒染料，氧化型为蓝色，述原型为无色。由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色；而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱，使美蓝处于氧化态，从而被染成蓝色或淡蓝色。3液泡系的专有染料中性红。小性红是一种低毒性染料，可以使活细胞液泡着红色，而细胞质和细胞核不被着色；死细胞的液泡不被着色或浅染，染料弥散于整个细胞中，细胞核和细胞质被染成红色。有时侯为了增加染色效果可以将两种染料结合使用，如甲基

5、蓝-屮性红混合染色法。细胞染色法是常用的细胞死活鉴定方法，简便，易于操作实验是利川了死活细胞在生理机能和性质上的差异来迹行的。主要体现在：1）死活细胞细胞膜通透性的差杲：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过，而细胞死亡Z后，细胞膜受损，通透性增加。2）死活细胞在代谢上的差升：由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的述原能力，而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱。活细胞必需通过控制物质进岀细胞膜來保持内部生理坏境的稳定性。细胞死后，细胞膜通透性发生改变，原先不能进入细胞的物质也能够进入细胞。常见的细胞燃料冇：中性红、台盼蓝

6、、甲基蓝、美蓝、荧光索双酷酸酯等。台盘蓝染料正常情况下被活细胞阻拦在细胞膜外，只冇细胞膜受损或者细胞死亡后，才能进入细胞，从而与解体的DNA结合，使其着色，因此，活细胞一般不能被台盘蓝染色，而死细胞会被染成蓝色。通过显微镜很容易就能识别出死亡冻得被染色的细胞，并可用细胞计数板进行计数。伊红和苏木精是最常用的细胞染色剂（参见脂肪细胞染色实验）。伊红在很多僅物技术屮都有应用。伊红有自发荧光特性。悬液中细胞的精确计数，往往采用血细胞计数器。【实骑仪器及试剂】血细胞计数板、显微镜、盖玻片、试管、吸管细胞悬液、台盼蓝、伊红、Nacl溶液【实验步骤】1、将培养箱屮的培养皿取出：2、先用肉眼，然后用显微镜

7、观察培养的细胞。记录细胞悬液的颜色是浅紫色；同时和其它组的培养皿进行対比，观察培养液的颜色是否正常，同时分析原因；3、敲打培养血，使得贴壁细胞释放出來，旋摇培养血，使细胞充分悬浮；4、取0.5ml细胞悬液，分别加入一滴台盘蓝，或1.5ml伊红。轻轻充分混合后，室温下染色二分钟。5、在计数器上盖上盖玻片。6、将细胞悬液滴在计数器两边V字形椚内。细胞悬液依毛细作用扩散到计数区。7、在镜下计数。取中间和四个角上的中