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1、Livin和PCNA在尖锐湿疣组织中的表达和意义尖锐湿疣(condylomaacumillata,CA)是由人类乳头瘤病毒(Humanpapilloma说ms，HPV)感染引起的多发于生殖器部位的良性乳头瘤样增生,临床上增生快，治疗后常易复发，且部分病例有转化为恶性肿瘤的可能，这可能与CA存在细胞凋亡和增殖异常有关。为了探讨CA的发病与细胞增殖和凋亡的关系，我们运用免疫组化”法分别检测hivin和PCNA蛋白在CA组织中的表达，以探讨两者在CA发生发展中的作用及其相互关系。1对象与方法1.1对象收集48例CA
2、患者的外阴皮损组织标本,其中男30例，女18例;年龄16〜69岁，平均％・8岁;病程15〜90天，平均蝎。4天;均经组织病理学确诊。取材前均未接受免疫性药物、激光、冷冻等治疗，且无其他系统疾病。对照组为10例手术室手术切除的正常成年男性包皮组织,均经组织病理学证实为正常上皮。所有标本经4%多聚甲醛国定，石蜡包埋，连续作4um厚度切片后覆于用多聚赖氨酸处理过的玻片上，60°C烤箱烤片4h以上,备用。1.2方法免疫组化SP法检测Linvin蛋口和PCNA蛋口的表达。兔抗Livin多克隆抗体(浓缩型)、PCNA鼠抗
3、人单克隆抗体、通用型叩检测试剂盒均购于北京博奥森牛:物有限公司,DAB酶底物显色剂购自北京中杉生物有限公司。操作步骤均按试剂盒说明进行，抗体工作液Livin为1:80o所有切片染色均釆用相同条件，每批染色均设阳性对照、阴性对照。阳性对照用已知染色阳性的组织切片，阴性对照以PBS代替一抗孵育组织切片。1.3结果判定Livin阳性显色为棕黄色颗粒，主耍为胞质着色，少量胞核着色,PCNA阳性显色为棕黄色颗粒，丄要为胞质着色。评分标准参照文献，根据组织切片中阳性细胞百分比和着色强度进行半定量分级评分。阳性细胞百分比口
4、0%为0分,10%〜25%为1分,25%〜50%为2分,50%〜75%为3分,>75%为4分。着色强度：0分为不着色;1分为浅黄色;2分为黄色;3分为棕黄色。取上述两项分值的乘积作为总积分:0分为阴性(・),1〜4分为弱阳性什),6〜8分为阳性(++),9〜12分为强阳性什++)。1.4统计学处理采用SPSS13.0统计软件包对所得数据进行处理，采用x2检验和Speaman相关检验分析,P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1CA组织中Livin蛋白表达阳J性反应大多定位于胞膜和胞膜附近的胞浆，多呈黄色，
5、棕黄色至棕褐色着色。阳性细胞多呈鱼网状分布于隸层的屮、上部和颗粒层。2.2CA组织中PCNA蛋口的表达PCNA蛋白阳性定位于胞核。阳性着色大多呈棕色，棕褐色至深褐色。阳性细胞大多弥散分布于基底层及棘层的下部,棘层的中上部和颗粒层也有少量表达。多数正常上皮细胞大多呈条带状分布于基底层,阳性着色大多呈淡棕色至深棕色.在CA组织屮,39例Livin表达阳性组织屮,PCNA全部表达阳性;9例Livin表达阴性组织中，有5例PCNA呈阳性表达，经直线相关分析显示二者表达强度呈正相关(r=0.59?P<0.01)o3讨论
6、越来越多的资料表明，肿瘤不仅是增殖、分化异常的疾病,同时也是凋亡异常的疾病。细胞的凋亡与增殖同良恶性肿瘤的发生发展密切相关。尖锐湿疣是一种良性乳头瘤样增生，已有研究发现细胞凋亡和增殖异常在CA的发生发展中起着重要的作用。Livin是近年来发现的一种新的凋亡抑制蛋白(inhibitorofapoptosisprotein,IAP)家族成员，该蛋白是从人类基因组t-DNA文库中克隆得到，因其从人的胎肾cDNA文库屮发现，又被命名为KIAP(kidneyinhibitorofapoptosisprotein)[5]
7、,特异的高表达丁某些实体肿瘤组织和肿瘤细胞系，能抑制许多凋亡刺激剂诱发的细胞凋亡，提示该基因可能在肿瘤的发生和发展中起着重耍作用。本实验中我们应用免疫组化检测CA组织中h说n的表达，结果发现CA组织中IIVin阳性表达率及阳性表达强度均高于正常上皮，说明其参与CA的发病。以往研究结果发现IIV血是一种凋亡抑制蛋白,其可能直接通过抑制制caspase的细胞凋亡途径，抑制细胞凋亡，间接导致细胞数目增加，从而使疣体过度增生，参与CA的发生、发展。PCNA增殖细胞核抗原(Proliferatingcellnuclea
8、rantigen,PCNA)是反映细胞增殖活性的重耍标志之一。本研究结果显示，尖锐湿疣组织中PGNA阳性表达率及阳性表达强度均高于止常上皮，呈明显高表达,提示CA组织屮细胞增殖活跃。本研究还发现，相比较Livin蛋白表达阴性组织,PCNA标记指数在Livin蛋口表达阳性组织中较高。而随着Livin蛋口阳性表达越强，PCNA标记指数也越高，统计分析证实Livin蛋白的表达与PCNA标记指数呈止相关，有
