一种快速筛选可与G-四链体相互作用的中草药的方法研究.pdf

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1、一种快速筛选可与G-四链体相互作用的中草药的方法研究陈蕊2015年1月中图分类号：UDC分类号：一种快速筛选可与G-四链体相互作用的中草药的方法研究作者姓名陈蕊学院名称生命学院指导教师赵东旭副教授答辩委员会主席谭信教授申请学位理学硕士学科专业生物学学位授予单位北京理工大学论文答辩日期2015年1月研究成果声明本人郑重声明：所提交的学位论文是我本人在指导教师的指导下进行的研究工作获得的研究成果。尽我所知，文中除特别标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得北京理工大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的合作者对此研究工作所做的任何

2、贡献均已在学位论文中作了明确的说明并表示了谢意。特此申明。签名：日期：北京理工大学硕士学位论文摘要人类端粒DNA末端富含鸟嘌呤的重复序列，在含有单价金属离子的生理条件下，可以自发形成G-四链体结构。G-四链体结构的形成，可以直接破坏端粒酶对端粒的催化位点，抑制端粒酶的活性，进而抑制肿瘤细胞的增殖。以G-四链体DNA为靶点，能够稳定或促进形成G-四链体的分子配体，都能够作为端粒酶活性的抑制剂而用于肿瘤的治疗。中国是中草药的发源地，所含草药资源极其丰富，中草药的药效与安全性也得到了一定的验证。并且，高效液相色谱因其诸多优点广泛应用于中草药的分析中。基于上述背景，本课题将利用高效液相色谱法去探索

3、一种快速筛选能够与G-四链体DNA相互作用的中草药的方法。首先，G-四链体的形成及结构表征。本研究中采用的富GDNA序列为5’-GGGGATGCAGGGGTACCAGGGGCGTACGGGG-3’，经PAGE纯化，含有31个碱基。用PBSK+缓冲液溶解，12h后进行圆二色谱测定，结果表明，富GDNA序列在实验条件下形成了一定的G-四链体结构。其次，G-四链体与阳性对照三乙烯四胺的相互作用。通过探索高效液相色谱的工作条件，进行相关的色谱操作。三乙烯四胺与G-四链体DNA混合后进行相互作用分析，G-四链体出峰时间以及峰值明显改变。该阳性对照为探究中草药与G-四链体的相互作用奠定了基础。最后，探

4、索出利用高效液相色谱法分析中草药与G-四链体DNA的色谱条件，然后从经正丁醇、乙醇萃取的56种中草药中，快速筛选出能够与G-四链体发生相互作用的5种中草药，分别为西洋参、人参、石见穿、野菊花、女贞。这5种中草药分别经紫外吸收光谱测试，进一步确认了它们能够与G-四链体发生相互作用。关键词：高效液相色谱；G-四链体；三乙烯四胺；中草药I北京理工大学硕士学位论文AbstractTheendofhumantelomericDNAisrichinGuaninerepetitivesequences,andwhenexposedtothephysiologicalenvironmentwithuniv

5、alentmetalion,itcanformspontaneouslyG-quadruplexstructure.G-quadruplexstructurecandestroythelocuswheretelomerasecatalyzestelomere,whichinhibitstheactivityoftelomeraseandinhibitstumorcellproliferationfurther.AnyligandwhocanstabilizeorpromotetheG-quadruplexesformationcanbeusedinthetreatmentoftumoura

6、sthetelomeraseinhibitors.ChinaisthebirthplaceofChineseherbalmedicine,whereChineseherbalmedicineresourcesarereallyrich.What’smore,theefficacyandsafetyofChineseherbalmedicinehasalsobeenre-examedtosomedegree.Besides,withsomanyadvantages,thehighperformanceliquidchromatography(HPLC)hasbeenwidelyusedint

7、heanalysisofChineseherbals.Justbecauseoftheabove-mentionedbackground,thepresentthesiswantstoresearchamethodofquicklyscreeningChineseherbalsthatcaninteractwithG-quadruplexDNAwiththehelpofhighperformanceliquidchrom