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《生物工艺原理第二版课件 教学课件 作者 贺小贤 主编 课件工艺原理第十一章课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、第十一章动植物细胞培养动植物细胞培养：指动植物细胞在体外条件下的存活或生长,此时细胞不再形成组织.第一节动物细胞培养一、动物细胞的培养特点（一）往往需要多种氨基酸、维生素、辅酶、核酸、嘌呤、嘧啶、激素和生长因子等，其中很多成分系用血清、胚胎浸出液等提供，在很多情况下还需加入10％的胎牛或新生牛血清。对营养的要求较高动物细胞的培养特点(二)不仅需要严格的防污染措施，同时还要用空气、氧、二氧化碳和氮的混合气体进行供氧和调节pH。生长缓慢，对环境条件要求严格动物细胞的培养特点(三)原代培养是指直接从有机体得到的组织或将其分散成细胞后开始的培养。转
2、移一部分初代培养物到新鲜培养基中的培养，叫做传代培养或再培养。具有原代培养和传代培养的特性动物细胞的培养特点（四）但也有一些细胞，如淋巴细胞，能够在悬浮状态生长，细胞悬浮培养具有多方面的优越性，易于大规模生产，便于过程的控制。具贴壁依赖性生长的特征二、每代贴附生长细胞的生长过程游离期贴壁期停止期对数生长期潜伏期游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮状态．也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。10分钟一4小时贴壁期：细胞附着于底物上，游离期结束。细胞株平均在10分钟一4小时贴壁。血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素、胶原等糖蛋白（生长基质
3、），这些带正电荷的糖蛋白的促贴壁因子先吸附于底物上，悬浮细胞再与吸附有促贴壁因子的附着。进口塑料培养瓶涂有生长基质（化学合成的功能基团）胶原、玻璃、塑料、其它细胞等水：新鲜配置的三蒸水或去离子水平衡盐溶液：无Ca2+、Mg2+的缓冲液PBS：NaCl8.0gKCl0.2gNa2HPO4.H2O1.56gKH2PO40.20加水至1000ml三、细胞培养用液的配制胰酶（Trypsin）溶液和EDTA溶液胶原酶（collagenase）溶液消化液：四、培养基培养基（培养液）是维持体外细胞生存和生长的溶液，分天然培养基和合成培养基。天然培养基：天
4、然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。营养成分丰富，培养效果好来源受限。成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析。易发生支原体污染优点缺点合成培养基:目前已设计出许多种培养基，如TC199、MEM、RPMI-1640、DMEM等。合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。标准化生产，组分和含量相对固定。成本低缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。优点缺点人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。无血清培养基在基础培养基中补充各
5、种必需因子，如激素、生长因子、结合蛋白、贴壁和扩展因子等。基础培养基无血清培养基替代血清的补充成分组成。研制策略包括五、抗菌素的使用：在培养液配制后，培养液内常加适量抗菌素，以抑制可能存在的细菌的生长。青霉素和链霉素联合使用。培养基内青霉素、链霉素最终使用浓度为每毫升100单位。庆大霉素：每毫升100单位——方便、广谱、稳定六、培养技术动物细胞大规模培养与实验室培养相比,培养条件更严格,控制难度更大,其培养方法可概括为:悬浮培养 固定化培养 微载体(Microcarrier)培养法（１）细胞悬浮培养法动物细胞在培养液中呈悬浮状态
6、生长繁殖的培养方法谓之悬浮培养法。其培养方式：批量法 半连续法 连续法可连续收集部分细胞进行移植继代培养,传代时无需消化分散,免遭酶类,EDTA及机械损害。细胞收率高,并可连续测定细胞浓度,还有可能实现大规模直接克隆培养。细胞悬浮培养法的优点悬浮培养的反应器气升式反应器 笼式通气搅拌罐 中空纤维管 陶质矩形通道蜂窝状生物反应器（2）固定化培养法动物细胞限制或定位于特定空间位置的培养技术谓之细胞固定化培养法。固定化方法有:吸附法(所用载体有陶瓷颗粒,玻璃珠及硅胶颗粒)包埋法(将细胞包埋于琼脂,琼脂糖,胶原及血纤维等海绵状基质中
7、)细胞可维持在较小体积培养液中生长;细胞损伤程度低;易于更换培养液;细胞和培养液易于分离;培养液中产物浓度高,简化了产品分离纯化操作.固定化培养的优点多层平板装置螺旋卷膜培养器多层托盘式培养器卷带式培养器中空纤维及流化床式培养器固定化培养装置（3）微载体培养方法将动物细胞吸附于微载体表面,在培养液中进行悬浮培养,使细胞在微载体表面长成单层的培养方法称为微载体培养法或微珠培养法.兼具单层培养和悬浮培养的优势,且是均相培养。细胞所处环境均一,放大容易。培养操作可系统化,自动化,障低了污染发生的机会。微载体培养优点第二节植物细胞培养在人工控制下高
8、密度大量培养有益植物细胞技术称之为植物细胞大规模培养。目的在于通过细胞工业规模培养,获得细胞,初级及次级代谢产物,为药品,食品及化工行业提供服务一、培养基培养基的成分由无机盐类、
