microRNAs在秀丽隐杆线虫逃避行为中的作用.pdf

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1、分类号密级编号碎士研究像儉式题目在秀丽隐杆线虫逃避行为中的作用学院（所、中心）云南省生物资源保护与利用重点实验室一省部共建国家軍点实验室堉育基地专业名称生物化学与分子生物学研究生姓名张露学号导师姓名职称教授二〇一五年五月microRNAs在秀丽隐杆线虫逃避行为中的作用研究生：张露导师：邹成钢教授，论文独创性声明及使用授权本论文是作者在导师指导下取得的研宄成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研宄成果，不存在剽窃或抄袭行为。与作者一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。现就论文的使用对云南大学授权如下：学校有权保

2、留本论文（含电子版），也可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文；学校有权公布论文的全部或部分内容，可以将论文用于查阅或借阅服务；学校有权向有关机构送交学位论文用于学术规范审查、社会监督或评奖；学校有权将学位论文的全部或部分内容录入有关数据库用于检索服务。内部或保密的论文在解密后应遵循此规定）研究生签名：‘上乂：导师签名期云南大学硕士学位论文摘要是长度为左右内源性非编码的小分子。主要以两种不同的方式下调靶基因的表达：（）与相应的靶标以完全互补的方式结合，特异性降解靶基因与的’非翻译区以部分互补的方式结合，抑制其翻译，这些都说明可以在转录水平或转录后水平调控基因，发挥着重要的调控作用。目

3、前，已被报道在线虫中参与寿命、发育等生物学过程。之前我们实验室通过高通量测序技术和蛋白组学技术发现秀丽隐杆线虫在致病菌铜绿假单胞菌侵染后，在标准食物大肠杆菌相比某些的表达量和蛋白水平出现了不同程度的上调和下调。从上调的个中我们对个突变株进行逃避实验发现，大部分的缺失后并不影响线虫对铜绿假单胞菌的的逃避行为，但、、三个突变株的逃避能力明显下降，与相比逃避能力下降了约表明、、三个突变株在线虫的逃避反应中起正调控作用。接着我们用三个权威性的预测基因的网站（、、预测三个突变株的靶基因，发现三个网站中重叠的靶基因有个、有个、有个。因通常结合在靶基因的’从而导致靶基因的蛋白质转录水平下调。我们将这

4、三个和以前蛋白组下调的蛋白进行比对，发现有两个重叠的基因，即的和的的线虫在逃避实验中，与突变株相比逃避能力得到了一定程度的恢复，表明在线虫逃避反应中起负调控作用。而没有作用。通过蛋白质相互作用网络（，我们找到了与相互作用的蛋白。线虫实验结果显示，没有影响逃避行为的基因，即没有找到的下游基因。因此我们转为寻找参与逃避反应的转录因子和上游信号通路，对这些基因筛选，发现转录因子能够改变的表达。综述所述，当受到铜绿假单胞菌侵染后，线虫体内转录因子可能被抑制，其负调控表达能力降低，使得增强对基因云南大学硕士学位论文的降解作用，最终促进线虫对病原菌的逃避行为。关键词铜绿假单胞菌秀丽隐杆线虫干扰；逃

5、避行为转录因子云南大学硕士学位论文，、、，，，，云南大学硕士学位论文，，，云南大学硕士学位论文目录栽一、秀丽隐杆线虫一研究宿主与微生物相互作用的模式生物秀丽隐杆线虫的生物学特征秀丽隐杆线虫作为模式生物所具有的优势二、参与线虫逃避反应的信号通路蛋白介导的信号通路和样受体信号通路参与线虫逃避反应胰岛素样信号通路参与线虫逃避反应信号通路参与线虫逃避反应信号通路参与线虫逃避行为三、的研究进展的发现的生物合成机制的作用原理的研究应用及进展第二章材料和方法一、实验仪器、试剂、培养基主要仪器主要试剂主要试剂盒主要培养基及配制方法常用溶液的配制二、实验材料实验所用到的线虫实验菌株云南大学硕士学位论文三

6、、实验方法固体培养基培养线虫液体培养基培养线虫线虫同步化线虫逃避实验线虫荧光照线虫显微注射线虫杂交线虫的提取、逆转录、定量第三章实验结果蹄选出参与逃避的报告基因和验证上调确定的表达部位预测靶基因参与介导的逃避靶基因相互作用蛋白是否参与调节线虫逃避寻找参与逃避反应的转录因子和上游通路寻找参与逃避反应的转录因子寻找参与逃避反应的上游信号通路第四章讨论参考文献觀云南大学硕士学位论文第一章绪论一、秀丽隐杆线虫一研究宿主与微生物相互作用的模式生物选择合适的模式生物用于研究病原菌的致病机理是非常重要的。目前，一般多用小型哺乳动物（如小鼠、大鼠、树駒等）进行研宄，但选用哺乳动物作为宿主缺陷明显：操作

7、复杂繁琐、实验周期长、实验经费昂贵、可变影响因素多。而秀丽隐杆线虫〖以其实验周期短、背景资料详细、廉价、观察和操作方便等优势，成为用来研宄病原细菌致病机制的经典模型秀丽隐杆线虫的生物学特征秀丽隐杆线虫是一种自由穿梭生活在土壤中的无脊椎动物，属于腐生线虫，以细菌为食（标准实验室条件下使用微生物大肠杆菌），其生命周期从卵到成虫大约为天，平均寿命为周。线虫很小呈婦虫状，成体肉眼可见长仅为，身体直径仅有。秀丽隐杆线虫通体透明，体表有角质层，无分节，有个