糖酵解在秀丽隐杆线虫天然免疫中的作用.pdf

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1、分类号密级编号‘硬士研究生嗲像讼式题目糠酵解在秀丽隐杆线虫天然免疫中的作用学院（所、中心）云南省生物资源保护与利用重点实验室—省部共建国家重点实验室培育基地专业名称微生物学研究生姓名沈艳生学号导师姓名张克勤职称教授导师姓名邹成钢职称教授二零一五年五月云南大学二零一二届硕士学位论文糖解在秀丽隐杆线虫天然免疫中的作用研宄生：沈艳生导师：张克勤教授邹成钢教授论文独创性声明及使用授权本论文是作者在导师指导下取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，

2、不存在剽窃或抄袭行为。与作者一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。现就论文的使用对云南大学授权如下：学校有权保留本论文（含电子版），也可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文；学校有权公布论文的全部或部分内容，可以将论文用于查阅或借阅服务；学校有权向有关机构送交学位论文用于学术规范审查、社会监督或评奖；学校有权将学位论文的全部或部分内容录入有关数据库用于检索服务。内部或保密的论文在解密后应遵循此规定）研究生签名：导师签名：曰期：云南大学硕士论文摘要糖酵解代谢

3、途径和三羧酸循环途径是生物提供能量和中间代谢物产生的核心枢纽，是真核生物和异养生物中普遍存在的保守的基本代谢途径。秀丽隐杆线虫保留有这些代谢网络通路，参与机体自身的营养供求和应对环境压力。线虫通过复杂的机制调控代谢途径中产生的底物，如变构调控、底物修饰等方式延长寿命、调控生殖和发育、维持其结构和应答环境变化。在秀丽隐杆线虫中，代谢酶突变或者缺失会影响寿命、发育等生物学过程，同时其代谢产物也可作为信号分子参与线虫中的信号转导，但糖酵解代谢途径和三羧酸循环途径是否参与线虫的天然免疫，目前还没有报道。

4、利用病原菌铜绿假单胞菌■侵染线虫作为模型，对此进行研究。首先，秀丽隐杆线虫被铜绿假单胞菌杆菌侵染，激活低氧诱导因子，暗示引起线虫低氧应激。其次，对糖酵解代谢途径中相关代谢酶的基因进行了筛选，发现糖酵解限速酶磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶基因被干扰后，对铜绿假单胞杆菌的侵染作出免疫应答，证明糖酵解途径参与线虫的天然免疫。研宄结果还表明，在侵染后，介导调控糖酵解循环的关键酶磷酸果糖激酶和和丙酮酸激酶的表达上调。最后，对三羧酸循环途径中相关代谢酶基因进行扫描，结果发现，三羧酸循环途径中相关代谢酶基因被沉默后

5、，并不影响线虫对的侵染的抵抗，提示三羧酸循环代谢途径不参与线虫的天然免疫。综上所述，研究结果表明，侵染后诱导线虫低氧应激，进而上调糖酵解限一——■——一—“速酶磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶基因表达，参与线虫对铜绿假单胞菌杆菌———■■■“抵抗。因此，本研究揭示了一个新的线虫天然免疫途径。关键词：天然免疫；代谢酶；云南大学硕士论文，，，，，，云南大学硕士论文，云南大学硕士论文目录绪线虫天然免疫研究背景及现状参与先天性免疫和调控代谢的信号途径材料方实验仪器、试剂、培养基主要仪器主要试剂主要试剂盒主要培养

6、基及配制方法二■■实验所用到的线虫实验菌株三实验方法固体培养基培养线虫线虫同步化线虫细菌侵染线虫实验从购买的线虫突变株的处理方法线虫基因组提取线虫的提取、逆转录、定量魏織在铜绿假单胞菌侵染下，线虫产生低氣应激糖酵解代谢途径在线虫抵抗铜绿假单胞菌中的作用铜绿假单胞菌侵染诱导、、和表达升高丙酮酸处理増加线虫对铜绿假单胞菌侵染旳抵抗在侵染下，三接酸循环不参与先天性免疫云南大学硕士论文文献录云南大学硕士论文绪论线虫天然免疫研究背景及现状‘先天性免疫组成第一道防线应答病原菌，其防御病原菌的分子机制通过适应

7、性免疫系统触发激活多种特异性应答（；。多年以来，无脊椎动物秀丽隐杆线虫和果螺作为模式生物研究宿主与病原微生物相互作用的机制。秀丽隐杆线虫作为模式生物对生命科学研究进展有着举足轻重的地位。线虫的研究解释了复杂的生物进程，细胞凋亡、坏死、细胞增殖及细胞程序性死亡等机制的研宄为人类深入了解相关疾病的病理和生物学过程发挥了重要的作用。的发现解释了生物体本身如何对抗外源基因侵害的自我保护的基因表达调控机制（。各种动物之间的先天性免疫系统相对保守，故模式生物秀丽隐杆线虫得以广泛地应用于解决宿主和病原菌相互作

8、用的分子机制。无脊椎动物模式生物线虫、、染色体和基因组很小，个体短小，生命周期短，全身透明，可在显微镜下看到线虫体内的器官如肠道、生殖腺等。实验室中以大肠杆菌为食，易培养。多为雌雄同体，自然状态下仅有千分之一为雄性（；线虫（辟细胞数量恒定，雌雄同体成虫有个体细胞，雄虫有个体细胞，成虫可以产生个后代；从卵到成虫需要寿命约周，是实验室进行生物学研宄最佳生物模型；受精卵通过过增殖、分化形成相应的组织和器官等，皮肤、肌肉组织、消化系统、神经元组成完整的有机体。基于结构简单、遗传背景相对清楚、基因操作相对