水处理微生物学课件-6.ppt

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1、内容提要：1.微生物生长繁殖的概念2.微生物生长繁殖的测定方法3.微生物的典型生长曲线及不同时期的特点4.微生物的连续培养方法和应用第七章微生物的生长繁殖生物个体物质有规律地、不可逆增加，导致个体体积扩大的生物学过程。生长：生物个体生长到一定阶段，通过特定方式产生新的生命个体，即引起生命个体数量增加的生物学过程。繁殖：生长是一个逐步发生的量变过程，繁殖是一个产生新的生命个体的质变过程。在高等生物里这两个过程可以明显分开，但在低等特别是在单细胞的生物里，由于细胞小，这两个过程是紧密联系又很难划分的过程。微生物生长繁殖的相关概念发育：微生物的生长与繁殖是个交替过程，从生长到繁殖的

2、量变到质变的过程是发育。群体生长＝个体生长+个体繁殖可以用重量、体积、群体浓度或密度指标来测定。一般微生物的研究和应用中，只有群体的生长才有意义，所以通常讲的“生长”是指群体生长。一个微生物细胞合适的外界条件，吸收营养物质，进行代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用个体的生长原生质的总量（重量、体积、大小）就不断增加如果各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，引起个体数目的增加。群体内各个个体的进一步生长群体的生长（1）概念细菌两次细胞分裂的时间间隔。（2）影响正常情况下，世代时间稳定世代时间受培养环境的影响。不同的微生物，生长繁殖速度不同，世代时间也有

3、不同。一般，原核微生物的繁殖速度大于真核微生物。好氧微生物快于厌氧微生物。2.世代时间第一节微生物的纯培养一、纯培养的定义微生物在自然界中都是混杂地生活在一起。要想研究或利用某一种微生物，必须把它众混杂的微生物类群分离出来，以得到只含有一种微生物的培养。微生物学中将在实验条件下，从一个细胞或同种细胞群繁殖得到的后代称为纯培养。二、纯培养的分离方法平板划线分离法稀释倒平板法单孢子或单细胞分离法利用选择性培养基分离法（一）平板划线分离法用接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步

4、分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。（二）稀释倒平板法先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如10、100、1000、10000倍…），然后分别取不同稀释液少许，与已溶化并冷却至45℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出出菌落。稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。（三）单孢子或单细胞分离法采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个孢

5、子进行培养以获得纯培养。单细胞分离法的难度与细胞或个体的大小成反比，较大的微生物如藻类、原生动物容易，个体较小的细菌较难。对操作技术有比较高的要求，多限于高度专业化的科学研究中采用。（四）利用选择性培养基分离法各种微生物对不同的化学试剂、染料、抗生素等具有不同的抵抗能力，利用这些特性可配制合适某种微生物而限制其它微生物生长的选择培养基，用它来培养微生物以获得纯培养。另外，还可以将样品预处理，消除不希望分离到的微生物。如加温杀死营养菌体而保留芽孢，过滤去除丝状菌体而保留单孢子。微生物纯培养分离方法的比较分离方法应用范围平皿划线法方法简便，多用于分离细菌稀释倒平皿法即可定性，又可

6、定量，用途广泛单细胞挑取法局限于高度专业化的科学研究利用选择培养基法适用于分离某些生理类型较特殊的微生物测生长量直接法间接法测体积称干重含氮量生理指标法（耗氧量，酶活性等）计数器计数法电子计数器计数法涂片染色法直接法间接法液体稀释法平板菌落计数法比浊法测微生物数目三、微生物生长繁殖的测定方法1、生理指标法微生物的生理指标，如呼吸强度，耗氧量、酶活性、生物热等与其群体的规模成正相关。样品中微生物数量多或生长旺盛，这些指标愈明显，因此可以借助特定的仪器如瓦勃氏呼吸仪、微量量热计等设备来测定相应的指标。常用于对微生物的快速鉴定与检测2、计数器计数法缺点：不能区分死菌与活菌；不适于对

7、运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；3、平板菌落计数法样品充分混匀；每支移液管及涂布棒只能接触一个稀释度的菌液；同一稀释度三个以上重复,取平均值；每个平板上的菌落数目合适，便于准确计数；一个菌落可能是多个细胞一起形成，所以在科研中一般用菌落形成单位（colonyformingunits，CFU）来表示，而不是直接表示为细胞数。4、液体稀释法主要适用于只能进行液体培养的微生物，或采用液体鉴别培养基进行直接鉴定并计数的微生物。对未知样品进行十倍稀释，然后根据估算取三个连续的