尺寸排阻色谱法.ppt

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1、尺寸排阻色谱法周嘉欣简介尺寸排阻色谱法(sizeexclusionchromatography，SEC)，是按分子大小顺序进行分离的一种色谱方法。被广泛应用于大分子分级，即用来分析大分子物质相对分子质量的分布。分子筛效应：其固定相为化学惰性多孔物质——凝胶，凝胶具有一定大小的孔穴，体积大的分子不能渗透到孔穴中去而被排阻，较早的淋洗出来；中等体积的分子部分渗透；小分子可完全渗透入内，最后洗出色谱柱。这样，样品分子基本按其分子大小先后排阻，从柱中流出。特点1.保留时间是分子尺寸的函数，有可能提供分子结构的某些信息。2.保留时间短，谱峰窄，易检测

2、，可采用灵敏度较低的检测器。3.固定相与分子间作用力极弱，趋于零。由于,柱子不能很强保留分子因此柱寿命长。4.不能分辨分子大小相近的化合物，相对分子质量差别必须大于10％能得以分离。5.大分子的流程短，移动速度快，先流出色谱柱；小分子的流程长，移动速度慢，后流出色柱；而中等分子居两者之间。6.生物相容性好，有很高的活性回收率。类型凝胶过滤色谱：用于分析多肽、蛋白质、核酸、多糖等。凝胶的代表是葡萄糖系列；流动相是水凝胶渗透色谱法：用于分析高聚物的摩尔质量，如：聚乙烯、聚氯乙烯等。常用的凝胶为交联聚苯乙烯凝胶；流动相是有机溶剂（四氢呋喃）凝胶定

3、义：指含有大量液体(一般是水)的柔软而富于弹性的物质，它是一种经过交联而具有立体网状结构的多聚体。分子排阻色潽法对所用的凝胶的基本要求：a.化学性质惰性，不与溶质发生任何作用，可以反复使用而不改变其色谱性质。b.尽可能不带电荷以防止发生离子交换作用。c.颗粒大小均匀，机械强度尽可能高。固定相分类按机械强度可分为软性、半刚性和刚性凝胶三类。软性凝胶如葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶都具有较小的交联结构，其微孔能吸入大量的溶剂，并能溶胀到它们干体的许多倍。它们适用以水溶性溶剂作流动相，一般用于小分子质量物质的分析，不适宜用在高效液相色谱中半刚性凝胶如高交

4、联度的聚苯乙烯（Styragel）比软性凝胶稍耐压，溶胀性不如软性凝胶。常以有机溶剂作流动相。用于高效液相色谱时，流速不宜大。刚性凝胶如多孔硅胶、多孔玻璃等它们既可用水溶性溶剂又可用有机溶剂作流动相，可在较高压强和较高流速下操作。一般控制压强小于7MPa，流速＜1cm3·s-1；否则将影响凝胶孔径，造成不良分离。按化学性质分有机凝胶（均匀凝胶、半均匀凝胶、非均匀凝胶）；无机凝胶（非均匀凝胶）。流动相的选择排阻色谱所选用的流动相必须能溶解样品，并必须与凝胶本身非常相似，这样才能润湿凝胶。当采用软性凝胶时，溶剂也必须能溶胀凝胶。溶剂的粘度要小，

5、因为高粘度溶剂往往限制分子扩散作用而影响分离效果。常用的流动相有四氢呋喃、甲苯、氯仿、二甲基酸胺和水等。观谢看谢