平面色谱技术03.ppt

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1、5.平板色谱一般分离过程将试样点在色谱滤纸或层析板的一端，并将该端浸在作为流动相的溶剂（常称之为展开剂）中，随着溶剂向上的移动，经过试样点时，带动试样向上运动。纸层析和薄层层析流动相的移动是依靠毛细作用。比移值（R)：溶质移动距离与流动相移动距离之比1）纸色谱载体：滤纸（纤维素），可吸附~22%水，其中~6%与纤维素上的羟基结合（通过氢键和分子　　　　　之间的偶极作用）形成固定相纸~22%H2O~6%H2O固定相流动相SSSSSSS纸色谱属于分配色谱------正相和反相分配纸色谱2)薄层色谱薄层分离机制主要应用范围氧化铝板吸附脂肪和芳香化合物、生物硅胶板吸附碱、甾类、萜类改性硅胶C2,C

2、8,C18RP正相、反相非极性物质、极性物质CN板正相、反相农药、酚类、甾类NH2板正相、反相、核苷酸、农药、酚类、甾类、阴离子交换维生素类、嘌呤衍生物纤维素分配氨基酸、梭酸乙酰纤维素正相、反相蒽醌类、抗氧化剂离子交换剂阴、阳离子交换氨基酸、梭酸、氨基糖、肽聚酰胺分配黄酮类、酚类葡聚糖凝胶凝胶过滤蛋白质、核苷酸2.薄层色谱操作技术1)薄层板(1)载体：硅胶：表面带有硅醇基，pH=4.5，经150℃活化脱水后，4~6个硅醇基/nm2(2)薄层参数：①厚度：普通薄层高效薄层制备薄层0.25mm0.2mm0.5~2mm②活度：吸附剂的吸附能力可用活度表示,它随含水量的增加而减弱活度级别含水量Ｗ％吸

3、附力硅胶氧化铝Ⅰ－－增强Ⅱ１０３Ⅲ１２６Ⅳ１５１０Ⅴ２０１５硅胶、氧化铝活度、含水量与吸附力的关系不同温度下硅胶表面硅醇基吸附水分子层的损失情况(3)粘合剂与添加剂①粘合剂a.煅石膏（CaSO4·2H2O)：120~140℃烘烤2~4h,过200目筛，密闭备用。b.羧甲基纤维素钠（ＣＭＣ-Ｎa)：0.2~1.0%②添加剂a.荧光指示剂ZnSO4:Mn254nmZnS·CdS:Ag366nmb.酸、碱或缓冲液c.硝酸银溶液Ｒ：饱合化合物炔烃反式烯烃顺式烯烃(4)薄层的制备方法①手工制板a.软板b.硬板(含粘合剂)匀浆涂布凉干活化②预制板：玻璃板、塑料板、铝箔板a.普通薄层预制板----

4、--硅胶、氧化铝、纤维素、硅藻土、聚酰胺、离子交换纤维素、烷基键合硅胶反相板b.高效薄层预制板------氨基、氰基键合硅胶板、手性预制板、聚酰胺、混合预制板（如：氧化铝-纤维素、纤维素-硅胶、硅藻土-硅胶等）(5)薄层板的活化吸附剂的表面及其孔隙的表面存在许多活性点，活性点的强度和数目较大时，吸附剂的活度就高，吸附剂的保留能力也较高，被保留物质R值就小。①活化：105~120℃干燥0.5~1hⅡ~Ⅲ级②活度的标定：a.氧化铝薄层活度的标定染料溶液的配制：称取偶氮苯30mg和对-甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红、对-氨基偶氮苯各20mg溶于四氯化碳50ml中，摇匀备用。标定方法：取上述溶液2

5、0μl点于待测板上，用四氯化碳展开，测量五种染料的R，由下表中确定薄板的花度级别。染料活度级别（R值）ⅠⅡⅢⅣ偶氮苯0.590.740.850.95对-甲氧基偶氮苯0.160.490.690.89苏丹黄0.010.250.570.78苏丹红0.000.100.330.56对-氨基偶氮苯0.000.030.080.19氧化铝薄层的活度级别b.薄层活度的标定染料溶液的配制：称取对-二甲氨基偶氮苯、靛酚蓝、苏丹红（苏丹Ⅲ）各20mg溶于1ml氯仿中，摇匀备用。标定方法：取上述溶液点于待测板上，用正己烷-乙酸乙酯（9：1）展开，三种染料能分开，对-二甲氨基偶氮苯在前缘，靛酚蓝在其次、苏丹红走在最

6、后，这样的硅胶活度与前述Ⅱ级氧化铝的活度相当。（6）薄层板的预处理常用方法：用氯仿-甲醇(1:1)或所用展开剂先展开一次空白薄层板（展距要大一些），在110℃干燥0.5~1h，干燥器中保存备用。除有特殊规定外，预制板在使用时不需任何预处理。（7）烧结薄层板和棒状薄层机械强度高、热稳定性好、耐酸并可反复使用2）点样：（1）样品溶液的制备①纯品的溶解②样品的提取与净化a.溶剂提取法b.液液萃取法c.液固萃取法-----亲脂型和亲水型固体萃取剂③溶剂的选择a.溶剂对溶质的溶解度相对较小，否则会出现点样环形色谱效应；b.溶剂的粘度不宜太高，以便于点样；c.溶剂的沸点要适中。(2)点样①样品浓度0.0

7、1~1.00%②点样体积经典薄层1~5μl高效薄层0.1~0.5μl点样过多会造成原点“超载”，展开剂产生“绕行”现象使斑点拖尾或重叠，严重影响分离。③点样直径经典薄层<5mm(一般3mm)高效薄层1~2mm④点样间距经典薄层1~2cm高效薄层<0.5cm⑤点样方法a.点状点样b.带状点样c.自动点样d.接触点样接触点样示意图3）展开：（1）展开方式①线性展开a.上行展开b.下行展开c.双向展开d.近水平展开