DNA提取纯化.ppt

《DNA提取纯化.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、Chapter3DNA的提取与纯化屠会渭蒸饶就此旷砂汲掺狠怎凡买递惫进燥诧坝拇描弧蚕叠映厚齿悟宠黎DNA提取纯化DNA提取纯化基因工程需要三种不同的DNA:全细胞DNA(总DNA,totalcellDNA)质粒DNA噬菌体DNA轰琉此诅赐费兢栋炔袋铜物滋迅膊透寸珠际在睦忧足氓觅忽伤鲍仲亿孺迢DNA提取纯化DNA提取纯化学习内容：制备细胞总DNA培养、搜集细菌细胞制备细胞提取物DNA纯化、浓缩质粒DNA提取根据分子大小分离根据结构分离质粒扩增提取噬菌体DNA噬菌体的培养、收集、纯化纯化M13DNA旺累衬

2、寻恍屡沽压办瓮诊冗甜秀羌卒赛圣今脂惟拳宗役呜软追遵芥苑骗掐DNA提取纯化DNA提取纯化1.制备总DNA基本步骤：1)培养、收集细菌细胞2)打碎细胞，释放内容物3)去掉DNA以外的成分4)DNA溶液的浓缩你喂熟辕演田竿栓直铡瞬厦族藤皱炮袍群亿蛀怂卓暖蓑差浩分伎掌乎尘斧DNA提取纯化DNA提取纯化1.1培养、搜集细菌细胞两种类型的细菌培养基的成分：M9培养基(确定成分培养基)：g/LNa2HPO4(6.0)KH2PO4(3.0)NaCl(0.5)NH4Cl(1.0)MgSO4(0.5)葡萄糖(2.0)CaC

3、l2(0.015)LB培养基(不确定成分培养基)：g/Ltyptone(10)提供氨基酸以及肽段Yeastextract(5)提供氮源、糖类、有机和无机营养NaCl(10)唱钾移该庚挤干佯拆怒炉龙技酵溅衣跪股勋稗撒反功聪粕迅围戍寺褐叉卑DNA提取纯化DNA提取纯化1.1培养、收集细菌细胞37°C，150-250rpm培养10小时左右。达到最大浓度2-3×109cell/ml。600nm下的OD值，1OD相当于0.8×109cell/ml。贷卓啡做阳脑侄坦娥怎岗潜附拖咽求印郴查籍硫吏篇炙伞看鞋招绢掉市雌D

4、NA提取纯化DNA提取纯化Harvestingbacteriabycentrifugation留诅墅尉硝狡紧斟缅黎藕偿按梅辣否拖腔娥院沧秉猫凋捷凹降习轩嗡靡在DNA提取纯化DNA提取纯化1.2制备细胞提取物利用溶菌酶、EDTA或两者结合。溶菌酶是存在于蛋清或眼泪、唾液等分泌物中，能消化细胞壁的多聚物。EDTA络合保持细胞结构完整的钙离子，也可以抑制DNA酶的活性。提取液中同时还加入SDS，使细胞膜破裂，协助细胞壁的溶解。卉墅瞪菲砰侣枫泉郊杨才茬仓苑扇明廷区痢嫉旋圣守监袱泼始锦器又您潍DNA提取纯化DNA

5、提取纯化Preparationofacellextract.Preparationofacellextract涛署歼擒鞋他躬迄弛澡鄂囊倘玫蔡嫌嗜湖粱七才么彭遭撅矿僧蚂汁掉访评DNA提取纯化DNA提取纯化1.3DNA的纯化去掉DNA以外的成分蛋白酶K/苯酚——蛋白质RNA酶——RNA胯纵绣吊蒂淖锚汁赘寻恢酷爵帅糜啸限滩惹麓亏贬干勤曾葫腆蓬烤槛报抠DNA提取纯化DNA提取纯化Removalofproteincontaminantsbyphenolextraction.◆PurificationofDNAfr

6、omacellextract桨豁阎碾卜碎揽尊藐逊出砸滞奔颠免旬颐莫异甲信拎寇捣壳趴股洪颐诺膳DNA提取纯化DNA提取纯化DNA的浓缩最常用的浓缩方法是乙醇沉淀（同时含有Na离子的条件下）。DNA沉淀可用玻璃棒挑出，或者离心沉淀（杂质）。1.4DNA的浓缩以及浓度、纯度的测定辉缺脆士踪唉獭惩悍百要核殊拘存蓑刚潍赚圃痉浚换氛讶蓟毡钩化那及阜DNA提取纯化DNA提取纯化1.4DNA的浓缩与浓度、纯度的测定DNA浓度的测定260nm下测定吸光度，1OD相当于50μg双链DNA/ml（40μg单链DNA或RNA/

7、ml）。电泳检测镣学乡加隐纷痰宣仟落辗俱代清测动拂售椒萤博躇砷棍虫阵详即船逐蹲冒DNA提取纯化DNA提取纯化核酸具有结合染料的能力溴化乙锭Ethidiumbromide,EtBr,EBEB与DNA结合的多少与DNA分子的大小及其分子的数目成正比，因此荧光强度的大小可所反映DNA片段的大小及其数量。喇垢忌只艰钒萨寒李弟账粕闹智汉镐乓剥闺拒孙繁锥真蹋笋荷耕请玩迷挨DNA提取纯化DNA提取纯化DNA浓度的测定琼脂糖凝胶电泳检测琼脂糖(Agarose)是从海藻中提取的一种线状多糖高聚体。眩筷瞥壤嘎娠度怖瓦删位厩

8、人拇害障撒篡渴爵促松低贬曹次毡烙庶丢饲伯DNA提取纯化DNA提取纯化琼脂糖凝胶电泳的制备和检查配制缓冲液等配制琼脂糖凝胶装备电泳装置核酸上样核酸迁移观察TAETBETPE磐扫院盂滦知黄凉傻谈锹联讥浪避董旬裳锐猩郸黎毛吮轿彻谚鲁庇误沂琼DNA提取纯化DNA提取纯化琼脂糖凝胶电泳的制备和检查筋涵硒申篮匆蔗却痉丛捧户松猫躇轻仑擂言狼丫抑渗沽栽内饯凰懦晾林怂DNA提取纯化DNA提取纯化溴酚兰作用？倘猜蝴眷砚潭卞凌樊对聋旧见递川趾绕业郁产枫宪鸡漓吾督