课题2　多聚酶链式反应扩增DNA片段 (4).pptx

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1、课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段专题五DNA指纹检测亲子鉴定生物的亲缘关系DNA鉴定技术应用于灾害遇难者的身份鉴定如何利用有限的生物材料获得大量的DNA片段?多聚酶链式反应——PCR扩增DNA技术应用1.理解PCR的原理和反应过程。(重、难点)2．尝试PCR技术的基本操作。3．说出PCR技术的应用。课程目标温故知新项目复制时间场所模板原料酶能量产物遵循原则细胞核（主要）、叶、线两条母链脱氧核苷酸DNA分子(2个，相同)碱基互补配对（A-TG-C）解旋酶、DNA聚合酶等ATP细胞分裂间期细胞内DNA复制解旋酶催化（氢键断裂）解旋：模板（在DNA聚合酶的催化下，利用游离

2、的脱氧核苷酸进行）复制:以母链为模板进行碱基配对母链（旧链）子链（新链）子代DNA:同时进行(边解旋边复制）组成温故知新细胞内DNA复制DNA分子能准确复制的原因是什么？①DNA分子独特的双螺旋结构为复制提供了精确的模板;②通过碱基互补配对，保证了复制能够准确地进行。自主预习1．概念：PCR即__________________，是一种________迅速__________的技术。它能以极少量的________为模板，在短时间内复制出上百万份的________。体外扩增DNADNA多聚酶链式反应拷贝一、PCR扩增的原理及条件自主预习2．原理(1)DNA的热变性：在_

3、_________的温度范围内，DNA___________结构解体，________分开，这个过程称为________。当温度缓慢________后，两条彼此________的DNA链又会重新结合成________。(2)子链的合成：①需要______________；②合成方向总是从子链的______________。一、PCR扩增的原理及条件80～100℃双螺旋结构双链降低分离双链DNA聚合酶5′端到3′端变性自主预习3．条件(1)________模板。(2)分别与模板DNA相结合的两种________。(3)A、T、G、C四种_____________。(4)

4、________DNA聚合酶。(5)需要稳定的________和能严格控制________的温控设备（PCR仪器）。一、PCR扩增的原理及条件DNA引物脱氧核苷酸耐热的缓冲液温度自主预习PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可以分为________、________和________三步。从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与________结合，进行DNA的延伸，这样，DNA聚合酶只能特异地复制处于________之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈________扩增。二、PCR反应过程变性复性延伸引物Ⅱ两个

5、引物指数课堂合作探究1．变性当温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链。2．复性温度下降到50℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。（解旋：高温破坏氢键）PCR具体反应过程课堂合作探究3．延伸温度上升到72℃左右，溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、C、G)在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。（合成子链）PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可以分为变性、复性和延伸三步。从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸，这样DNA聚合酶只能特异地复制处于两个

6、引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。PCR具体反应过程如图所示：课堂合作探究PCR具体反应过程95°C50°C72°CPCR过程与细胞内DNA复制过程相比，主要有两点不同，它们是()①PCR过程需要的引物是人工合成的单链DNA或RNA②PCR过程不需要DNA聚合酶③PCR过程中，DNA的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的④PCR过程中，DNA不需要解旋，直接以双链DNA为模板进行复制A．③④B．①②C．①③D．②④[解析]PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比较，主要有两点不同：(1)PCR过程需要的引物是人工合成的单链DNA或RNA

7、，长度通常为20～30个核苷酸。(2)PCR过程中，DNA解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的。答案为C[答案]C1.理论上DNA呈指数方式扩增。若开始只有一个DNA提供模板，则循环n次后有个；若开始有N0个DNA提供模板，则循环n次后获得的子代DNA数目为个。2.DNA含量的测定：DNA在260nn的紫外线波段有一强烈的吸收峰，峰值的大小与DNA含量有关。可以利用DNA的这一特点进行DNA含量的测定，具体方法如下：PCR扩增的计算与DNA含量的测定课堂合作探究2nN0·2nPCR扩增的计算与DNA含量的测定课堂合作探究DNA含量的测定