毒素类物质银杏酸.ppt

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1、毒素类物质银杏酸060420127黄娟银杏酸的简介银杏酸的分布银杏酸属于漆树酸类物质，存在于银杏树的叶、果实和外种皮中,其中外种皮中的含量最高[1]。银杏酸的作用银杏酸具有抗氧化、清除自由基和抗炎作用。Itokawa等[2]报道了它的抗肿瘤活性；Irie等[3]认为银杏酸可抑制与肥胖症和高血脂症有关的一种关键酶甘油三酯合成酶GPDH的活性，从而可以预防由此引起的一系列疾病。此外银杏酸还具有强烈的杀虫、抗菌、杀菌、抗病毒等活性。银杏酸这些独特的药理活性和毒性使它成为人们研究的热点之一。银杏酸的结构

2、银杏酸的结构是在水杨酸C6位上接一含13～19碳,双键数0～3长碳链，故银杏酸为一同系混合物。其侧链分别为C13H27,C15H29，C15H31，C17H33和C17H31等的银杏酸，可分别以(C13:0),(C15:1),(C15:0),(C17:1)和(C17:2)等符号简单表示[2]。银杏酸的结构式[4]银杏酸的物理性质性状纯品银杏酸为无色油状或粉状，酸性物质，在石油醚中可析出针状结晶，熔点41~42℃。银杏酸具有免疫毒性作用(会引起漆毒样皮炎)，被认为是毒性成分，对人类的健康有潜在的危

3、害。紫外吸收银杏酸在紫外光照射下会产生强烈的淡蓝色荧光。溶解性银杏酸的溶解性与所连的R基有关，水杨酸C6上接长碳链后极性急剧下降，因此银杏酸属于脂溶性物质。它易溶于石油醚、正己烷等非极性溶剂，难溶于水、甲醇、乙醇等极性溶剂中。银杏酸的化学性质脱羧反应由银杏酸的结构式可以知道其苯环上相连的羧基会发生脱羧反应。文献[5]指出银杏酸在200℃左右会脱羧,对热不稳定。酯化和甲基化反应用少量的CH2N2处理,银杏酸的羧基就会发生选择性酯化。要使银杏酸酚羟基发生选择性甲基化,则需要用CH2N2与浸泡在含20

4、%CH3OH的乙醚中的银杏酸进行长时间的反应才可以[6]。酸性由于银杏酸的结构中有酚基和羧基存在，因此具有一定的酸性，在某些分离方法中就可以利用其酸性将它从混合物中提取出来。Gellerman[6]就利用其酸性,经皂化反应将它从原始萃取物中分离出来,以便进行下一步分离精制。另外还可以使用不同酸碱度的洗脱液将它和其他物质先后从柱上洗脱下来。银杏酸的光谱性质其分子结构决定了其光谱特性。据Tyman报道[7]银杏酸的最大紫外吸收出现在308nm左右。银杏酸的红外谱图中较突出的是1650cm-1处的羰基

5、伸缩振动峰。银杏酸的提取方法溶剂浸提法银杏酸为脂溶性物质，通常使用石油醚[8]、正己烷、氯仿等有机溶剂浸提。除常规的溶剂萃取方式外，为了尽量提高萃取的效率，同时还可以进行酶降解、微波及超声波预处理[9]等辅助萃取方式。超临界流体法它利用超临界流体作为萃取剂从液体和固体中提取某种成份，以达到分离或提纯的目的。沈刚等[10]，报道了一种用改性超临界二氧化碳萃取和离线的反相高效液相色谱分析银杏叶提取物中银杏酸含量的方法。银杏酸的分离纯化方法硅胶柱层析法硅胶柱层析即采用硅胶为介质，利用样品中各组分与硅胶

6、间吸附力的不同，再通过调节洗脱液的极性，使目标组分被洗脱下来从而与杂质分离，它是分离银杏酸最常用的方法[9~12]。银杏酸所采用的洗脱液主要有石油醚、石油醚-乙酸乙酯等。HPLC纯化法vanBeek等[13]利用普通反相柱和包被了银离子的离子交换柱双柱串联的方法,以甲醇:乙酸（99:1）作为流动相制备得到六种银杏酸单体。银杏酸的分析测试方法HPLC分析[14~18]液相色谱法是目前检测银杏酸最常用的方法。GC分析[19]因为银杏酸在GC测定前需要一个复杂的预净化-衍生化过程且GC分析的灵敏度不好

7、，在银杏叶活性物质的测定中使用较少。分光光度法分析分光光度法具有仪器、试剂耗费低，测定速度快等优势。仰榴青等[20]也提出了以分光光度法测定银杏酸的操作，但其实际使用不如HPLC法方便。TLC定性检测TLC具有设备简单、操作方便、分离速度快及测试成本低等特点。李英华等[21]用硅胶G薄层板对银杏酸进行检测。以环己烷:乙酸乙酯:醋酸（70:30:1）为展开剂，展开8cm后，置于薄层色谱扫描仪扫描（254nm）,银杏酸显蓝色荧光，其中银杏酸Rf为0.65。它也是检测银杏酸的常用方法。银杏酸提取和分离

8、纯化工艺提取工艺称取一定量的银杏叶，以石油醚为溶剂在80℃下进行索氏回流抽提。抽提液减压浓缩至膏状，得粗提物样品。分离纯化工艺粗提物样品加少量石油醚溶解，过硅胶柱层析，以石油醚－乙酸乙酯（9：1）溶液洗脱，直到洗脱液在254nm处不显荧光。洗脱液浓缩至膏状物，加入甲醇室温下超声波萃取。甲醇萃取液添加适量的水除杂，离心，取上清液。上清液再经过硅胶柱层析净化，以石油醚－乙醚－乙酸（89：11：1）溶液洗脱，最后得到较纯的银杏酸。银杏酸的总工艺流程石油醚回流硅胶柱初净化抽提甲醇超声波萃取加水除杂离心硅