PCR常见的曲线异常.pdf

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1、2018/9/10QPCRFAQ（四）-常见的曲线异常_搜狐科技_搜狐网QPCRFAQ（四）-常见的曲线异常2017-09-0816:02诺唯赞原标题：QPCRFAQ（四）-常见的曲线异常小V是真心地希望并祝福科研宝宝们实验都顺顺利利~可科研做多了，总会遇到各种奇葩结果，比如下面这些情况……不用担心，小V帮你找原因。1、扩增曲线形状异常a、扩增曲线不光滑：信号太弱，经系统矫正后产生。提高模板浓度重复实验。、扩增曲线断裂或下滑：模板浓度较高，基线的终点值大于Ct值。减小基线终点(Ct值-4)，重新分析数据。https://www.sohu.com/a/19040465

2、3_2168351/72018/9/10QPCRFAQ（四）-常见的曲线异常_搜狐科技_搜狐网图1基线设置不当扩增曲线c、个别扩增曲线突然骤降：反应管内留有气泡，由于温度升高后气泡破裂，使仪器检测到的荧光值突然降低所致。进行扩增反应之前要仔细检查反应管内是否有气泡残留。d、扩增曲线呈锯齿状且不连续：ROX添加不当，需校正参比染料。https://www.sohu.com/a/190404653_2168352/72018/9/10QPCRFAQ（四）-常见的曲线异常_搜狐科技_搜狐网2、反应结束无扩增曲线出现https://www.sohu.com/a/190404

3、653_2168353/72018/9/10QPCRFAQ（四）-常见的曲线异常_搜狐科技_搜狐网a、反应循环数不够：一般设置循环数为40，但需要注意的是过多的循环会增加过多的背景信号，降低数据可信度。、确认程序中是否设置了信号采集步骤：两步法扩增程序一般将信号采集设置在退火延伸阶段；三步法扩增程序应当将信号采集设置在72°延伸阶段（如蓝色箭头所示）。https://www.sohu.com/a/190404653_2168354/72018/9/10QPCRFAQ（四）-常见的曲线异常_搜狐科技_搜狐网c、确认引物是否降解：长时间未用的引物应先通过PAGE电泳检测

4、完整性，以排除引物降解的可能性。d、模板浓度太低：减少稀释度重复实验，一般未知浓度的样品先从最高浓度做起。e、模板降解：重新制备模板，重复实验。3、溶解曲线形状异常a、引物设计不佳①重新设计引物。https://www.sohu.com/a/190404653_2168355/72018/9/10QPCRFAQ（四）-常见的曲线异常_搜狐科技_搜狐网②若杂峰为引物二聚体，可尝试提高模板浓度、退火温度或者降低引物浓度进行改善。③当目的基因表达量极低时，染料法QPCR容易形成引物二聚体产物影响实验结果，此时，建议使用探针法定量。、ROX使用不当图9ROX添加不当溶解曲线

5、图https://www.sohu.com/a/190404653_2168356/72018/9/10QPCRFAQ（四）-常见的曲线异常_搜狐科技_搜狐网怎样避免ROX使用不当？①看清标签以防高、低浓度ROX拿错。②待ROX完全解冻且混匀后吸取添加。如果您有遇到更奇葩的异常曲线存在疑惑，可以直接拨打诺唯赞技术支持热线进行咨询哦~（更多详细内容敬请留意Vazyme针对QPCR的讲座信息。）返回搜狐，查看更多责任编辑：https://www.sohu.com/a/190404653_2168357/7