梅氏新贝尼登虫Mucin基因异构体的鉴定【毕业设计】

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1、本科毕业设计（20__届）梅氏新贝尼登虫Mucin基因异构体的鉴定目录摘要（Abstract）1引言12实验材料与方法22.1原料、仪器和试剂22.1.1原料与试剂22.1.2主要仪器22.1.3主要试剂及其配制32.2实验方法32.2.1梅氏新贝尼登虫成虫的分离与保存32.2.2总RNA抽提和cDNA文库构建32.2.3全长序列的获得42.2.4聚合酶链式反应(PCR)42.2.5DNA片段切胶纯化42.2.6T-A连接52.2.7感受态细胞制备(CaCl2法)52.2.8转化和筛选52.2.9质粒提取52.2.10未获全长序列的Mucin基因异

2、构体全长序列的获得62.2.11序列分析62.2.12梅氏新贝尼登虫不同生长阶段Mucin基因表达量的变化63结果与讨论73.1结果73.1.1全长序列的获得73.1.2Mucin基因重复区序列分析73.1.3Mucin基因蛋白产物的糖基化分析93.1.4Mucin基因异构体氨基酸序列比对103.1.5实时荧光定量PCR检测结果113.2讨论12致谢14参考文献14附录16摘要：Mucin基因是很多生命体广泛表达的一类基因，其编码的蛋白是分子量在40万以上的糖蛋白。这些蛋白广泛分布于机体多种器官和组织的黏膜表面，在寄主的侵染以及宿主的免疫反应中发挥

3、着重要作用。目的：对Mucin基因异构体序列特征进行分析和鉴定，为进一步探究梅氏新贝尼登虫寄生过程中Mucin基因发挥的作用奠定基础。方法：提取梅氏新贝尼登虫RNA并构建cDNA文库；设计兼并引物，获取Mucin基因异构体全长序列，若基因未获全长，可根据已获得的序列设计特异引物，进行末端扩增，从而获得Mucin异构体的全长序列；应用生物信息学软件对Mucin基因异构体序列特征进行分析和鉴定；利用实时荧光定量PCR分析梅氏新贝尼登虫不同发育阶段Mucin基因的表达情况。结果：克隆并测序了11条序列，序列特征与相关文献报道的Mucin基因序列特征吻合，

4、其中串联重复区由三种重复模体组成；分析发现Mucin基因编码高度糖基化蛋白，其中O—连接的糖基化是主要糖基化形式；Real-timePCR结果表明，与梅氏新贝尼登虫虫卵和成虫发育阶段相比，钩毛蚴发育阶段Mucin基因表达显著下调。关键词：Mucin基因；梅氏新贝尼登虫；异构体AbstractMucingenesarefoundandexpressedinmanylivingforms.Theproteinstheyencodeareglycoproteinswhosemolecularweightisabove400,000KDa.Thesepro

5、teinsexistonthemucousmembranesofmanykindsoforgansandtissuesfromorganisms.Theyplayanimportantroleintheprocessesduringwhichparacitesinfecttheirhostsandthehostsresisttheirparasites.Objective:ToanalyseandidentifythecharacteristicsofthesequencesfromdifferentMucingenesisoforms.Thisl

6、aysfoundationforfurtherresearchfortherolesMucingenesplayedinparasites’recognisingandattachingtotheirhosts.Methods:TheRNAfromNeobenedeniamelleniwasextractedanditscDNAlibrarywasbuilt.DegenerateprimersweredesignedtogetthewholesequencesofMucingenesisoforms.Ifthewholesequencescould

7、notbereceived,specialprimersweredesignedtogainthewholesequencesthroughRACEmethodaccordingtothesequenceswehadgot.CharacteristicsofthesequencesfromdifferentMucingenesisoformswereanalysedandidentifiedbybioinformaticalsoftwares.EpressionanalysisofMucingenesfromNeobenedeniamellenii

8、ndifferentdevelopmentalstagesisdoneusingReal-timePCR.Results: