正文描述:《梅氏新贝尼登虫Hsp90的分子鉴定【毕业设计】》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、本科毕业设计(20__届)梅氏新贝尼登虫Hsp90的分子鉴定目 录1引言12材料与方法12.1实验材料与仪器12.1.1梅氏新贝尼登虫采集与保存12.1.2主要试剂及仪器22.2实验方法22.2.1抽提总RNA22.2.2构建寄生虫cDNA文库32.2.2.1cDNA第一链的合成32.2.2.2cDNA第二链的合成32.2.2.3接头连接(AdaptorLigation)32.2.2.4限制酶XhoI酶切反应42.2.2.5使用SpinColumn除去短链cDNA42.2.2.6连接到特定质粒载体52.2.2.7质
2、粒转化52.2.3提取质粒52.2.4EST序列测序62.2.5梅氏新贝尼登虫Hsp90基因的生物信息学分析62.2.6梅氏新贝尼登虫Hsp90在不同发育阶段的表达分析73结果与分析73.1文库测序获得梅氏新贝尼登虫HSP90基因序列73.2梅氏新贝尼登虫HSP90基因核苷酸序列比对73.3梅氏新贝尼登虫HSP90蛋白的特征分析103.4梅氏新贝尼登虫HSP90二级结构分析113.5NmHsp90基因系统进化树分析123.6HSP90在梅氏新贝尼登虫不同发育时期的表达分析144讨论14致谢16参考文献17摘要:采用
3、文库测序的方法,从梅氏新贝尼登虫中克隆到热休克蛋白Hsp90基因(NmHsp90)的cDNA序列全长2295bp,含有1个30bp的5'非编码区(UTR)、99bp的3'UTR和2166bp的开放阅读框(ORF)。整个开放阅读框编码721个氨基酸,预测的相对分子质量为82799.8,理论等电点为5.01,无信号肽。在N端具有Hsp90基因保守的ATPase结构,在中间含有Hsp90家族5个保守信号区,含有Hsp90家族的C末端的保守序列MEEVD。氨基酸序列比对表明,NmHsp90氨基酸序列与革囊星虫和日本血吸虫的
4、Hsp90有一个相对较高的同源性,分别为76%、74%,与其他物种相似性在65.0%-72.6%。qRT—PCR分析表明,在虫卵期就能检测到Hsp90,且此时表达量最高,成熟期达到最低。梅氏新贝尼登虫Hsp90基因的克隆和比较分析在进一步深入研究Hsp90的功能及寻找防治此类病虫害的方法中具有重要意义。关键词:梅氏新贝尼登虫;Hsp90;克隆;序列分析Abstract:Theheatshockprotein90(HSP90)genefromNeobenedeniamelleni(Monogenea)(NmHsp90
5、)wasclonedusingtechniquesoflibrarysequencing.ThefulllengthofcDNAsequenceis2295bp,containinga5'UTR(untranslatedregion)of30bp,a3'UTRof99bp,andanORFof2166bp.TheORFsequenceencodesapolypeptideof721aminoacidswithanestimatedmolecularweightof82799.8DaandpIof4.96.There
6、isnosignaturepeptide.ItcontainsATPaseconservativedomainof(HSP90)inN—site,fiveclassicalHSP90signaturesequencesandMEEVDsignaturesequenceonC-site.AminoacidsequencecomparisonsshowedthatNmHSP90hadarelativelyhigherdegreeofidentitywiththeHSP90ofaSipunculidaPhascoloso
7、maesculenta(76%aaidentity)andaflatwormSchistosomajaponicum(74%)thanthatofotheranimals(65.0%-72.6%).TheqRT-PCRanalysisshowedthattheHsp90canbedetectedduiingitseggswhenitsexpressionlevelwashighest,butminimumduiingmaturity.CloningandcomparisonanalysisofHSP90genesf
8、romNeobenedeniamellenicouldbeusefulinthestudiesoftheHsp90'sfunctionandcontrollingN.girellaeinfections.Keywords:Neobenedeniamelleni;Hsp90;cloning;characterizationanalysis;sequencean
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