氨基酸的测定方法比较分析

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1、食物中氨基酸的测定方法 一、氨基酸自动分析仪法1.原理食物蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。一份水解液可同时测定天冬，苏，丝，谷，脯，甘，丙，缬，蛋，异亮，亮，酪，苯丙，组，赖和精氨酸等16种氨基酸，其最低检出限为10pmol。2.适用范围GB/T14965-1994食物中氨基酸的测定方法。本法适用于食物中的16种氨基酸的测定。其最低检出限为10pmol。本方法不适用于蛋白质含量低的水果、蔬菜、饮料和淀粉类食物的测定3.仪器和设备3.1真空泵3.2恒温干燥箱3.3水解管：耐压螺盖

2、玻璃管或硬质玻璃管，体积20～30ml。用去离子水冲洗干净并烘干。3.4真空干燥器（温度可调节）3.5氨基酸自动分析仪。4.试剂全部试剂除注明外均为分析纯，实验用水为去离子水。4.1浓盐酸：优级纯4.26mol/L盐酸：浓盐酸与水1：1混合而成。4.3苯酚：需重蒸馏。4.4混合氨基酸标准液（仪器制造公司出售）：0.0025mol/L4.5缓冲液：4.5.1pH2.2的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠（Na3C6H5O7.2H2O）和16.5ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2.24.5.2pH3.3的柠檬酸钠缓冲液：称取19.

3、6g柠檬酸钠和12ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节至pH至3.3。4.5.3pH4.0的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和9ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4.0。4.5.4pH6.4的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和46.8g氯化钠（优级纯）加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6.4。4.6茚三酮溶液4.6.1pH5.2的乙酸锂溶液：称取氢氧化锂（LiOH.H2O）168g，加入冰乙酸（优级纯）279ml，加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧

4、化钠调节pH至5.2。4.6.2茚三酮溶液：取150ml二甲基亚砜（C2H6OS）和乙酸锂溶液（2.6.1）50ml加入4g水合茚三酮（C9H4O3.H2O）和0.12g还原茚三酮（C18H10O6.2H2O）搅拌至完全溶解。4.7高纯氮气：纯度99.99%。4.8冷冻剂：市售食盐与冰按1：3混合5.操作步骤5.1样品处理：样品采集后用匀浆机打成匀浆（或者将样品尽量粉碎）于低温冰箱中冷冻保存，分析用时将其解冻后使用。5.2称样：准确称取一定量样品，精确到0.0001g。均匀性好的样品如奶粉等，使样品蛋白质含量在10～20mg范围内；均匀性差的样品如鲜肉等，为减少误差可适当

5、增大称样量，测定前再稀释。将称好的样品防于水解管中。5.3水解：在水解管内加6mol/L盐酸10～15ml（视样品蛋白质含量而定），含水量高的样品（如牛奶）可加入等体积的浓盐酸，加入新蒸馏的苯酚3～4滴，再将水解管放入冷冻剂中，冷冻3～5min，再接到真空泵的抽气管上，抽真空（接近0psi），然后充入高纯氮气；再抽真空充氮气，重复三次后，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在110±1℃的恒温干燥箱内，水解22h后，取出冷却。打开水解管，将水解液过滤后，用去离子水多次冲洗水解管，将水解液全部转移到50ml容量瓶内，用去离子水定容。吸取滤液1ml于5ml容量瓶内

6、，用真空干燥器在40～50℃干燥，残留物用1～2ml水溶解，再干燥，反复进行两次，最后蒸干，用1mlpH2.2的缓冲液溶解，供仪器测定用。5.4测定：准确吸取0.200ml混合氨基酸标准，用pH2.2的缓冲液稀释到5ml，此标准稀释浓度为5.00nmol/50μL，作为上机测定用的氨基酸标准，用氨基酸自动分析仪以外标法测定样品测定液的氨基酸含量。6.计算上机样品液（50mL）中氨基酸量（nmol）=上机标准液（50mL）中氨基酸量（nmol）×样品峰面积氨基酸标准峰面积所以，100g样品中氨基酸的mg数=上机样品液中氨基酸量（nmol）×f×Mr×100m×V×106式中

7、f--样品的稀释倍数Mr--氨基酸的相对分子量m--样品质量（g）V--上机时的进样量（此处为50μL）7.其他7.1测定条件（以Beckman-6300型氨基酸自动分析仪为例）缓冲液流量：20mL/h；茚三酮流量：10mL/h；柱温：50、60和70℃；色谱柱：20cm；分析时间：42min。7.2标准出峰顺序和保留时间序号出峰顺序保留时间/min序号出峰顺序保留时间/min1天冬氨酸5.559蛋氨酸19.632苏氨酸6.6010异亮氨酸21.243丝氨酸7.0911亮氨酸22.064谷氨酸8.7212酪氨酸24.525脯氨