M蛋白的检测与鉴定

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1、M蛋白的检测与鉴定一、M蛋白的基础知识M蛋白是浆细胞或B淋巴细胞单克隆人量增殖时所产生的一种异常免疫球蛋白，其氨基酸组成及排列顺序十分均一，空间构象、电泳特征也完全相同，本质为免疫球蛋H或其片段(轻链、重链等)。由于它产生于单一克隆(monoclone),乂常出现于多发性骨髓瘤(multiplemyeloma)＞巨球蛋白血症(macroglobulinemia)、恶性淋巴瘤(malignantlymphoma)病人的血或尿中，故称M蛋白。这些M蛋白大多无抗体活性,所以又称为副蛋白(paraprotein)«M蛋白血症可分为恶性与意义不明的两人类。恶性M蛋白血症多见于多发性骨髓瘤

2、(包括轻链病)、巨球蛋白血症、重链病、7SlgM病(Solomen-Konkel病)、半分子病及不完全骨髓瘤蛋白病(C端基因缺陷)等。意义不明的M蛋白血症(monoclonalgammopathyofundeterminedsignificance,MGUS)乂分为两种，一种是与其他恶性肿瘤(如恶性淋巴瘤)伴发者，另一种即所谓良性M蛋白血症。M蛋口的检测方法主要有琼脂或琼脂糖电泳、免疫电泳、免疫固定电泳、选择免疫电泳等。二、M蛋白的鉴定1.多发性廿髓瘤与巨球蛋白血症时的M蛋白检测和鉴定(1)血清总蛋白定量。90%的患者血清总蛋白含量升高(70%的患者＞100g/L),约10%的

3、患者正常或甚至偏低(如轻链病时)。(2)血清蛋白醋纤脱或琼脂糖电泳。M蛋白在电泳时出现典型的单株峰(亦称M区带)，特点是区带窄而浓，扫描时呈现尖高峰，在Y区高比宽32,在B区21。此M区带可因Ig的不同而出现在在Y〜a2的任何区域。M蛋白增殖的另一特点是其他各区带明显减少，显示图像较简单。有时有的患者血中M蛋白并不高，这是山突变细胞的Ig分泌能力决定的。这种病人的血清在电泳时M峰可不明显，易被其他蛋白掩盖，需采用稀释血清成应用其他敏感方法如免疫固定电泳來检测。（3）血清临定量。一般M蛋白所属临含量均显著增高，其他类Ig则止常或显著减低。（4）免疫电泳。%1止常人血淸免疫电泳结果

4、：可分辨出20多种蛋白成分。在阳极端有船形很浓的沉淀线为白蛋白。通常Ig组分靠阴极端，最靠近加样孔者为IgM,依次为IgA、IgG,三者成平滑的连续沉淀线。%1多发骨髓瘤:多发性骨髓瘤分IgG、IgA、IgM、Igl）和IgE5种,IgG和IgA又分亚类，所有Ig的轻链又分两个型。因此，免疫电泳时变形沉淀线的位置随各分子的电泳区带不同而异，从慢Y〜山区皆可出现。IgG1多出现在慢丫区，IgG4在B〜a2区。M蛋白与相应的抗重链血清、抗轻链血清形成迁移范围十分局限的浓密的沉淀弧°由于此种病人血清中Ig含量甚高，免疫扩散吋可出现抗原绝对过剩而不出现沉淀线，此时需稀释血清重做，往往可

5、获得满意结果。③巨球蛋白血症：由于IgM分子大量增殖所致。在免疫电泳时，常常出现以下特征：一是沉淀线明显变形。止常情况下，IgM形成短小沉淀线，不易看到变形。当IgM人量出现时，则会使整个IgM沉淀线变形。二是抗原孔周围和电泳纵轴出现团块状沉淀。三是电泳时IgM组分无迁移，这多是IgM分子聚合，电泳不移动所致。（5）尿本一周蛋H检测。%1定性检测：用热沉淀法和磺基水杨酸法。%1免疫电泳法：用待检尿浓缩后进行免疫电泳，大多数多发性骨髓瘤病人和轻链病患者，仅出现一条致密的弓形弯曲的沉淀线。木法60%〜80%的忡髓瘤病人和儿乎全部轻链病病人可检岀尿本周蛋白。%1轻链白蛋口一戊二醛交联

6、免疫电泳法：多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症及轻链病可呈阳性，正常人阴性。木法尿木周蛋白检出率为1（X）%,假阳性4%,尿屮含有200ug/ml时即可出现阳性结果。1.重链病时M蛋白检测与鉴定与多发性骨髓瘤相同，免疫电泳时由丁•重链分子较Ig分子小，故迁移率快，电泳位置较靠阳极侧（B〜a）o但重链病一般需选择免疫电泳证实。2.7SIgM病时M蛋白的检测少鉴定一般临M为五聚体，沉降系数为19S,而7SIgM®者的IgM为单体，沉降系数为7S。证明7SIgM有两种方法：一种是在测定IgM总量后，将被测血淸I〜2ml过Sepharose6B柱,再根据洗脱峰图用面积仪测出7SIgM占总I

7、gM的百分比，与IgM总量换算即得7SIgM的绝对值。另一方法即为植物血凝素（PHA）选择电泳。此法原理是五聚体IgMnJ-L；PHA结合形成沉淀，而单体IgM不与PHA结合。在琼脂胶中加入PHA,后进行电泳，五聚体IgM被PHA所阻留，而7SIgM继续向阳极泳动，并可与随后加至抗体槽中的IgM抗血清反应，形成单一沉淀弧。3.半分子病时M蛋白检测与鉴定所谓半分子病（half—molecule）是指此种M蛋白由一条〕重键和一条轻链组成，分子量是正常Ig分子的1/2或＜1/2（因半分子病肽链往往