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时间:2019-11-23
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1、图书馆室内空间布局探究论文[摘要]口的:在外源抗原表位表达载体系统屮构建并表达乙型肝炎病毒(HBV)抗原表位,并对其诊断敏感性进行评价。方法:人工合成编码HBV“a”抗原决定簇表位中24个氨基酸(S124147)的寡核苛酸序列,克隆入外源抗原表位表达载休系统FHVRNA213位点,构建重组质粒,在原核pET系统(BL21细胞)中表达。通过ELISA和Westernblot检测表达产物的抗原性,并以表达产物为包被抗原,通过ELISA和Westernblot检测58份乙肝患者血清抗HBso结果:嵌和蛋白可与抗HBs
2、特异性结合,其ELISA检测抗HBs阳性率为77.5%,Westernblot的为68%,而对照试剂盒的为62%O结论:在外源抗原表位表达系统屮表达的HBV重组抗原表位具有良好的抗原性,有诊断应用价值。[关键词]HBV;抗原表位;抗原性;FHVRNA2载体系统StudyonAntigenicityofHBVRecombinantEpitopeAbstractObjectiveConstructionandExpressionHBVrecombinantepitopeinaforeignepitopepresen
3、tingvector,andevalutionofdignosticsensitivityforantiHBswithHBVepitope・MethodsOligonucleotidsencodedtwentyfouraminoacids(aaS124147)whichiswithin”a”antigenicdeterninantweresynthesizedandinsertedintoaforeignepitopepresentingcarTierI3site(FHVRNA2cDNA13).IIBVepit
4、opewasexpressedinaprokaryoticcellularsystem(BL21cell).TheexpressionproductwasanalyzedanditsantigenicitywasfurtherstudiedbyELISAandWsternblotmethodwithchimericproteinascoatingantigen.weusedchimericproteinascoatingantigentotestantiHBswithELISAandWsternblotin58
5、seralsamples・ResultsThechimericproteinreactedwithantiHBsseraispecially.ThedetectionpositiveratioofantiHEsis77・5%and68%respectivelybyELISAandWsternblotwithchimericproteinascoatingantigen,thecontrol',,,swas62%・ConclusionHBVepitopeexpressedinaforeignepitopepres
6、entingcarrierpossessedgoodantigenicityanddiagnosticvalue・Keywords:HBV;Epitope;Antigenicity;FHVRNA2carriersystem乙型肝炎病毒(HBV)是乙型肝炎的病原体,并引起慢性肝炎和肝硬化,而且与肝癌的发生密切相关。迄今,对HBV感染最有力的预防和控制措施,仍是发展疫苗。FHVRNA2载体系统[1]是一个以昆虫小RNA病毒flockhousevirus外壳蛋白为载体的新型抗原表位表达载体,此系统中表达的载体蛋白可自
7、动组装成病毒样颗粒,使插入的外源抗原表位可以暴露在颗粒的表面,保持天然构象和免疫学特性。本研究拟将HBVa抗原表位插入到FHV外壳蛋白上,并对其抗原性及诊断意义进行了研究。1材料与方法1.1细胞重组质粒DNA大肠杆菌DH5ci用于重组质粒pETEDNA的克隆和扩增。大肠杆菌BL2KDE3)用于重组质粒pETEDNA的表达。质粒DNA在含200ug/ml氨节青霉素的LB或TB培育中生长,FHVRNA2载体系统即重组pETFHV构建见[llo1.2HBV抗原表位及重组pETE的构建和表达1.2.1HBV抗原表位及重
8、组pETE的构建人工合成HBV特异抗原表位E(氨基酸序列:124CTTPAQGNSMFPSCCCTKPTDGNC147)寡核昔酸序列:正向5'GATGCACGACTCCTGCTCAAGGCAACTCTATGTTTCCCTCATGTTGCTGTACAAAACCTACGGATGGAAATTGC3';反向3'CTACGTGCTGAGGACGAGTTCCGTTGAGATACAAAGGGAGTA
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