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1、图书馆室内空间布局探究论文［摘要］目的：在外源抗原表位表达载体系统中构建并表达乙型肝炎病毒(HBV)抗原表位，并对其诊断敏感性进行评价。方法：人工合成编码HBV“a”抗原决定簇表位中24个氨基酸寡核昔酸序列，克隆入外源抗原表位表达载体系统位点，构建重组质粒，在原核pET系统(BL21细胞)中表达。通过ELISA和Westernblot检测表达产物的抗原性，并以表达产物为包被抗原，通过ELISA和Westernblot检测58份乙肝患者血清抗。结果：嵌和蛋白可与抗—特异性结合，其ELISA检测抗■阳性率为％,Westernblot的为6
2、8%,而对照试剂盒的为62%。结论：在外源抗原表位表达系统中表达的HBV重组抗原表位具有良好的抗原性，有诊断应用价值。［关键词］HBV;抗原表位;抗原性体系统StudyonAntigenicityofHBVRecombinantEpitopeAbstract:ObjectiveConstructionandExpressionHBVrecombinantepitopeinaforeignepitopepresentingvector,LISAandWsternblotwithchimericproteinascoatingantige
3、n,thecontror,,,swas62%.ConclusionHBVepitopeexpressedinafbreignepitarrierpossessedgoodantigenicityanddiagnosticvalue.Keywords:HBV；Epitope；Antigenicity；乙型肝炎病毒(HBV)是乙型肝炎的病原体，并引起慢性肝炎和肝硬化，而且与肝癌的发生密切相关。迄今，对HBV感染最有力的预防和控制措施，仍是发展疫苗。丄空载体系统［1］是一个以昆虫小RNA病毒flockhousevirus外壳蛋白为载体的新型
4、抗原表位表达载体，此系统中表达的载体蛋白可自动组装成病毒样颗粒，使插入的外源抗原表位可以暴露在颗粒的表面，保持天然构象和免疫学特性。本研究拟将HBVa抗原表位插入到FHV外壳蛋白上，并对其抗原性及诊断意义进行了研究。1材料与方法细胞重组质粒DNA大肠杆菌DH5a用于重组质粒的克隆和扩增。大肠杆菌BL21(DE3)用于重组质粒的表达。质粒DNA在含200
5、ig/m1氨节青霉素的LB或TB培育中生长，载体系统即重组构建见［1］。抗原表位及重组的构建和表达抗原表位及重组的构建人工合成HBV特异抗原表位E（氨基酸序列：124CTTPAQGNS
6、MFPSCCCTKPTDGNC147）寡核昔酸序列：正向5'GATGCACGACTCCTGCTCAAGGCAACTCTATGTTTCCCTCATGTTGCTGTACAAAACCTACGGATGGAAATTGC3'；反向3'CTACGTGCTGAGGACGAGTTCCGTTGAGATACAAAGGGAGTACAACGACATGTTTTGGATGCCTACCTTTAACG5',两端为Bsu36I识别位点，与经Bsu36I作用后的重组混匀后置室温连接2h,转化DH5（x细胞，接种LB平板（200ng/mlAmp）培养。重组质粒经酶切筛选并经
7、DNA序列测定。携带HBV抗原表位的嵌和蛋白的表达重组pET系统中，嵌和蛋白的表达受T7启动子的控制［2］。BL21经重组转化后，在TB培养液中37°C生长16h〜18h,细胞经4000r/10min离心沉淀，用超声裂解缓冲液悬浮，超声裂解，裂解液经离心，弃上清，沉淀（包涵体）用8mol/L尿素溶解。及Westernblot分析方法见前文[1,3],3,二氨基苯胺四氢盐酸(DAB)底物试剂为AMRESCO公司产品;第二抗体辣根过氧化物酶(HRP)结合物购自华美公司。重组抗原表位诊断意义评价检测血清样本固相ELISA检测如前文所述[1]
8、,以纯化的嵌和蛋白为包被抗原，每孔100皿(含1昭纯化嵌和蛋白)，检测58份乙肝患者血清中抗■与抗检测试剂检测结果比较。阳性判断标准为(检测血清■底物对照A值)/(阴性血清底物对照A值)＞。邻苯二胺二氢盐酸(OPD)购自AMRESCO公司；第二抗体辣根过氧化物酶(HRP)结合物购自华美公司；乙肝患者血清由昆明市传染病医院收集;抗检测试剂盒购自上海科华公司。重组抗原表位Westernblot检测血清样本方法见前文[3],检测了58份乙肝患者血清样本。2结果携带HBV抗原表位的嵌和蛋白的表达载体系统即重组建见文献[4],其编码产物是FHV
9、外壳蛋白，三维立体结构已得到精确测定，其上有6个可供外源抗原表位插入的位点[5](见图1)。应用该系统，我们将人工合成HBV抗原表位寡核昔酸序列插入到重组上，构建携带HBV抗原表位的重组质粒，经NsiI和NeoI双酶切筛
