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1、硫酸化茯苓多糖探究进展茯苓(Poriacocos)是我国传统的名贵中药材，主产云南(云苓)、安徽(安苓)、贵州、广西、湖北、福建(闽苓)等地，为多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核，属担子菌纲真菌，具有渗湿、健脾、利尿等功能。茯苓多糖为我国传统中药茯苓的主要有效成分,可用于医疗、保健等领域,具有广阔的开发应用前景。为进一步优化茯苓多糖的提取工艺，促进其开发应用，文章参考大量国内外文献，对近几年茯苓多糖的提取、纯化及其应用作一综述。1茯苓多糖的化学组分众多文献报导B-D-(l-3,l-6)葡聚糖有显著的调理或增强人体免疫功能，但由于高分子量和复杂的高级分子结构,一些多糖
2、的水溶性很差，只有对这些多糖进行结构修饰和改造才可以更好地利用它们。Chihara等［1］通过Smith降解除去BT,6分支，将B-茯苓聚糖转化成B-茯苓多糖(Pachymaran),对实体瘤S180的抑瘤率从0提高到88%。Hamuro等［2］采用液固相振荡半合成工艺，制取了竣甲基茯苓多糖(Carboxymethylpachymaran,CMP),水溶性得到很大改善，动物试验的结果表明,CMP抗肿瘤作用较强。将天然多糖进行硫酸酯化修饰也是多糖结构改造的一个研究热点，多糖硫酸化后可以增强原有的生物活性或产生新的功能。2茯苓多糖的提取及纯化茯苓多糖主要存在于茯
3、苓细胞壁中，按照溶解度的不同又分为水溶性茯苓多糖和碱溶性茯苓多糖。通常采用水提醇沉法、碱提醇沉法提取。2.1水提醇沉法称取20g茯苓粉末一10〜20倍热水（95。0浸提一抽滤一滤液减压浓缩（浸提液：浓缩液=10:1）-4倍体积的95%乙醇沉淀（含醇量达80%）—于冰箱中静置过夜一离心一沉淀物用无水乙醇、丙酮、乙瞇洗涤一真空干燥得茯苓多糖粗品。该法采用水作为溶剂，具有价廉、无毒、操作安全等优点，其缺点是浸提时间长且提取率较低。2.2稀碱浸提法稀碱法浸提碱溶性茯苓多糖应注意，在提取结束后应迅速用醋酸中和，以免多糖活性受影响。称取20g茯苓粉，分3次溶于总共为10
4、倍体积的0.5MNa0H中，每次4匸浸提多糖8h,合并3次浸提上清液，10%醋酸中和至pH6〜7,4。（2冰箱中沉淀过夜。低温离心收集沉淀，去离子水洗涤沉淀3次，无水乙醇、丙酮和乙瞇依次洗涤,7（TC干燥得白色茯苓多糖，研成粉末待用。该法提取率较水提醇沉法高，但浸提程序较繁琐，浸提条件较剧烈，极易破坏多糖的立体结构，使其生物活性受到限制。2.3茯苓多糖的纯化将DEAE-650C层析柱水平衡后，取200mg精制多糖样品溶解于蒸馆水中上样，蒸馆水洗脱60mL后，以0〜3mol•L-lNaCl溶液梯度洗脱，流速1•OmL•min-1,每管收集2mL,分布收集、备用
5、。然后用硫酸-苯酚法检测多糖含量,具体操作如下。硫酸-苯酚显色液的配制：用50mL浓硫酸和10mL水配制实验用硫酸溶液，并加入0.6g苯酚，配制成显色液。显色方法：移取1.OOmL待测样品于试管中，加入5.OOmL显色液，振荡混匀。置于沸水浴中保温30min,立即置于冷水浴中，冷却至室温。以未加葡萄糖溶液作为空白对照。于490nm处测定系列葡萄糖溶液的吸光度。以葡萄糖浓度为横坐标、吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。测定样品溶液490nm处吸光度,据标准曲线计算多糖含量。3硫酸化多糖的生物活性研究硫酸化多糖具有独特的生物活性，主要表现在抗病毒、抗凝血、抗肿瘤、抗动
6、脉粥样硬化等方面。3.1硫酸化多糖的抗病毒活性抗病毒活性是硫酸化多糖最显著的活性，许多经硫酸酯化的多糖，如香菇多糖、地衣多糖、右旋糖杆、裂褶菌多糖、木聚糖、箸叶多糖的硫酸酯有明显的抑制HIV-l(HumanImmuneEfficiencyVirusTypel)活性，其作用机理是干扰HIV-1对宿主细胞的粘附作用，抑制逆转录酶的活性等。抗病毒硫酸酯化多糖的硫酸根取代度在1.5〜2.0为最佳，如果将这些多糖的硫酸根除去，则上述活性随之消失。Nakashima等人从海洋红藻Schizymeniapacifica分离到一种分子量大约为2X106Da的硫酸化多糖，含7
7、3%的半乳糖,20%的硫酸基，红外光谱和水解产物的分析表明这是一种Y-角叉菜胶。体外实验表明，该复合物能显著抑制逆转录酶的活性，在2X103抑制单位/mL的浓度下可抑制92%的反转录酶活性。该抑制活性是特异性的，对正常细胞的生长没有影响。3.2硫酸化多糖的抗凝血和抗血栓活性肝素和低分子肝素是硫酸化多糖抗凝血活性的代表，目前已经广泛应用于临床实践。低分子肝素是商品肝素降解的衍生物，平均分子量为4〜8kD,糖基数13〜22个。现在已知,肝素抗凝作用主要是靠与ATIII和凝血因子Ila形成三元复合物，使ATIII能有效灭活凝血酶。肝素的作用一方面有赖于分子中大量的
8、负电荷，另外，其松散的构象有利于与蛋白质或细胞表面位
