HPLC同时测定大豆甾醇提取物中β-谷甾醇和豆甾醇的含量

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1、万方数据2008年5月第30卷第5期中成药ChineseT憎ditionaIPatentMedicineMay2008V01．30No．5[科研报道]HPLC同时测定大豆甾醇提取物中13一谷甾醇和豆甾醇的含量李英霞‘，谷颜杰2，马承严3(1．山东省中医药研究院，山东济南250014；2．山东省分析测试中心，山东济南250014；山东中医学大学，山东长清250300)关键词：高效液相色谱；大豆甾醇提取物；B-谷甾醇；豆甾醇中图分类号：R284．1文献标识码：B文章编号：1001-1528(2008)05-0751-

2、02植物甾醇广泛存在于人体和动物体内。具有多种生物活性，被认为是降低胆固醇的有效物质。近年来，对植物甾醇的研究日益活跃，国内外药理及I临床研究表明，植物甾醇如B一谷甾醇、豆甾醇等有明显的降血脂、消炎、抗溃疡、抗肿瘤作用¨4J。关于甾醇类化合物的含量测定方法。早期曾采用过蕈量法一“⋯、紫外法‘it]、薄层扫描法。12．131。70年代多采用气相色谱法，一般先将甾醇类衍生化，再进行测定，处理过程比较繁琐¨⋯，有的不将甾醇类衍生化，直接采用气相色谱法¨“，但各成分之间分离效果并不理想。近年来。国内外文献报道曾采用高效液

3、相色谱法¨0‘”·16川进行测定。本研究从大豆油中提取大豆甾醇提取物。经药效学试验表明，具有明显的降血脂、抑制血小板聚集的作用。该提取物中主要含有B-谷甾醇、豆甾醇和菜油甾醇等有效成分，因分子结构很相近，分离和定量测定这些成分难度较大。在参考文献的基础上，通过反复实验，确定以高效液相色谱法测定大豆甾醇提取物中的主要成分B-谷甾醇、豆甾醇的含量，结果表明，对照品及供试品分离效果均良好。方法学考察结果也显示，此法准确性强，重现性好，操作简便。1仪器与材料1．1仪器Waters高效液相色谱仪(美国)，996光电二极管阵

4、列检测器。KQ一100DB型数控超声波振荡器(江苏省昆山市超声仪器有限公司)。1．2试药B一谷甾醇对照品(美国Sigma化学药品公司)，豆甾醇对照品(自制，采用高效液相归一化法测定纯度为98．37％)；大豆甾醇提取物(批号为20020509、20020510、20020511均由大豆油提取、纯化制得)；甲醇、乙腈、异丙醇均为色谱纯。2方法与结果2．1色谱条件色谱柱；Nova．PakC18柱(5p．m，150mm×4．6mm美国)，流速为2．0mL／min，检测波长为205nm，进样量为20灿，理论板数按B．谷甾醇

5、计算应不低于3000。2．2对照品溶液的制备分别取60。C减压干燥至恒重的p-谷甾醇、豆甾醇对照品10mg，精密测定，分别置10mL量瓶中，加异丙醇适量，超声使溶解，放冷，加异丙醇至刻度，摇匀，分别精密量取1mL，分别置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得混和对照品溶液。2．3供试品溶液的制备取大豆甾醇供试品(批号20020509)20mg，精密测定，置25mL量瓶中，加异丙醇适量。30。C超声使溶解，放冷，加异丙醇至刻度，摇匀，精密最取2．5mL置5mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用微孑L滤膜(

6、0．45仙m)滤过，取续滤液，即得。2．4线性关系考察分别取60。C减压干燥至恒蕈的豆甾醇、B一豆甾醇对照品各10mg，精密测定，分别置5ml量瓶中，加入异丙醇适量，超声使溶解，放冷，加流动相至刻度，摇匀，即得。分别精密肇取上述两种溶液各0．10、0．15、0．20、0．25、0．30mL，分别置5mL量瓶中，加异丙醇稀释至刻度，摇匀，照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)试验，分别精密量取上述对照品溶液稀释液20斗L，注入液相色谱仪，按上述条件测定即得，以进样垣(mg)与峰面积积分值进行回归计算

7、分别得回归方程．Y=69531X+291200，r=0．9999；13一谷甾醇的回归方程Y=49194X+248260，r=0．9997，表明豆甾醇在2．020～6．060Ixg，B一谷甾醇在2．080～6．240ttg，线性关系良好。2．5稳定性试验取上述供试品溶液分别于0、2、4、8、10、24h，精密量取20乩，注入液相色谱仪，按上述条件进行测定，其结果6个时间点测定的豆甾醇和B一谷甾醇峰面积积分值的变异系数分别为0．53％和0．67％，表明供试品溶液在24h内呈稳定状态。2．6精密度试验精密量取对照品溶液

8、20斗L，注入液相色谱仪。按上述测定方法测定，连续进样5次，豆甾醇和B．谷甾醇峰面积积分值的变异系数分别为0．77％和0．65％．表明仪器精密度良好。2．7重复性试验按上述含量测定方法，对5份样品(批号20020509)分别进行测定，豆甾醇的平均含量为40．02％，变收稿日期：2007-05—12基金项目：山东省中医药科技发展计划项目(99-44)。作者简介：李英霞(19