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1、糖化酶又称葡萄糖淀粉酶[Glucoeiniybsc,(EC.3.2.1.3.)],是淀粉分解酶的的一个分支。糖化酶是一种习惯上的名称，学名为a-1,4-葡萄糖水解酶(a-1,4-Glucanglucohydrolace)。它能把淀粉从非还原性未端水介a~l.4葡萄糖昔键产生葡萄糖，也能缓慢水解屮1.6葡萄糖昔键，转化为葡萄糖。糖化酶是出曲霉优良菌种(Aspergilusniger)经深层发酵提炼而成。(深层发酵是利用深层培养基的厌氧环境來培养厌氧细菌，但不能培养严格厌氧细菌,多用于兼性厌氧菌和微耗氧菌的培
2、养)重要糖化酶生产菌有：雪白根霉，德氏根霉，河内根霉，爪哇根霉，台湾根霉，臭曲霉，黑曲霉等。糖化酶用于以葡萄糖作发酵培养基的各种抗生素、有机酸、氨基酸、维生素的发酵；本品还大量用于生产各种规格的葡萄糖。总之，凡对淀粉、糊精必需进行酶水解的工业上，都可适用。最多应用于酒精、淀粉糖、味精、抗菌素、柠檬酸、啤酒等工业以及白酒、黄酒。一特性：1•作用方式：糖化酶的底物专一性较低，它除了能从淀粉链的非还原性未端切开a-1.4键处，也能缓慢切开a-1.6o因此，它能很快的把H链淀粉从非还原性未端依次切下葡萄单位，在遇
3、到1.6键分割，先将a-1.6键分割，再将a-1.4键分割，从而使支链淀粉水解成葡萄糖2.作用条件：糖化酶随作用的温度升高活力壇大，超过65°C又随温度升高而活力急剧卜•降，木品是最适作用温度是60-62°Co最适作用PII舒值在4.0-4.5左右3.活力检测：酶活力定义:1克晦粉或1毫升嗨液在40°C,PH4.6条件下，1小时水解可溶性淀粉产生1毫克葡萄糖的酶量为1个酶活力单位(U)。原理：糖化酶有催化淀粉水解的作用，能从淀粉分子非还原性末端开始，分解*1,4■葡萄糖甘键生成葡萄糖。葡萄糖分了中含有醛基
4、，能被次碘酸钠氧化，过量的次碘酸钠酸化后析出碘，再用硫代硫酸钠标准溶液滴定，计算酶活力。试剂和溶液：(1)乙酸一乙酸钠缓冲溶液(pH为4.6)o称取乙酸钠(CH3COONa・3H2O)6.7g,溶于水中，加冰乙酸(CH3COOH)2.6ml,用水定容至1000mlo配好后用pH计校正。(2)硫代硫酸钠标准溶液(Na2S2O3,0.05mol/L)。(3)碘溶液(1/212,0.1mol/L)。(4)氢氧化钠溶液(NaOH,0.1mol/L)。(5)200g/L可溶性氢氧化钠溶液。(6)硫酸溶液(2mol/
5、L)o(7)20g/L可溶性淀粉溶液。(8)10g/L淀粉指示液。仪器和设备：恒温水浴锅、秒表、比色管、玻璃仪器。・步骤：（1）待测酶液的制备称取酶粉1〜2g,精确至0.0002g（或吸取液体酶1.00ml）,先用少量的乙酸缓冲液溶解，并用玻璃棒捣研，将上清液小心倾入容量瓶中。沉渣部分再加入少量缓冲液，如此捣研3〜4次，最后全部移入容量瓶中，用缓冲液定容至刻度（估计酶活力在100〜250u/ml范围内）,摇匀。通过4层纱布过滤，滤液供测定用。（2）测定于甲、乙两支50ml比色管屮，分别加入可溶性淀粉25m
6、l及缓冲液5ml,摇匀后，于40°C恒温水浴屮预热5min。在甲管（样品）屮加入待测酶液2ml,立刻摇匀，在此温度下准确反应30min,立刻各加入氢氧化钠溶液0.2ml,摇匀，将两管取出迅速冷却，并于乙管（空白）中补加待测酶液2ml,吸取上述反应液与空白液5ml,分别置于碘量瓶中，准确加入碘溶液10ml,再加氢氧化钠溶液15ml,摇匀，密塞，于暗处反应15mino取出，加硫酸溶液2ml,立即用硫代硫酸钠标准溶液滴定，直至蓝色刚好消失为其终点。计算：X=（A-B）cx90.05x32.2/5x1/2xnx2
7、=579.9x（A-B）cxn式中X样品的酶活力（u/g或u/ml）A——空白消耗硫代硫酸钠溶液的体积（ml）B——样品消耗硫代硫酸钠溶液的体积（ml）c硫代硫酸钠溶液的浓度（mol/L）90.05——与1ml硫代硫酸钠标准溶液（1mol/L）相当的以克表示的葡萄糖的质量32.2——反应液的总体积（ml）5吸取反应液的休积（ml）1/2——吸取酶液2ml,换算为1mln——稀释倍数2——反应30min,换算成1h的酶活力系数所得的结果表示至整数二分离、提纯：2.工厂提纯可以使用大功率离心机离心沉淀收集或板
8、式过滤机收集后再做处理。（工厂最常用的鉴染菌手段是镜鉴，从形态上鉴别基本上能满足工厂需要,如果杂菌形态和生产菌一样而阳性阴性不一样，就考虑革兰氏染色。）使用方法和参考用量酒精工业：原料经蒸煮冷却到60°C,调PH值至4.0-4.5左右，加糖化酶，参考用量为80-200单位/克原料，保温30-60分钟，冷却后进入发酵。淀粉糖工业：原料经液化后，调PII值到4.0-4.5左右，冷却到60°C,加糖化酶，参考用量为100-300单位
