临床基因扩增(pcr)实验室设计探讨

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1、临床基因扩增（PCR）实验室设计探讨1概述临床基因扩增实验乂称PCR实验,是专门用來检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段。它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法,测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。由于该检测方法可以测岀普通检验难以检测出的病毒并具冇灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点,因此被临床保生广为认对,已广泛应用丁•医院的临床诊断和各防疫检测部门的禽疫病诊断。但是,这种实验需要有能保证绝对安全、配置合理的实验室和非常规范的操作为前提。近年來対临床基因扩

2、增检验实.….1概述临床基因扩增实验乂称PCR实验，是专门用來检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段。它町以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法，测出一些病毒含最不高的感染者体内是否含有特定的病毒。由于该检测方法可以测出普通检验难以检测出的病毒并具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品耍求低等优点，因此被临床医生广为认可，已广泛应用于医院的临床诊断和各防疫检测部门的禽疫病诊断。但是，这种实验需要有能保证绝对安全、配置合理的实验室和非常规范的操作为前提。近年来对临床茶因扩增检验实验室的建设越來越

3、得到重视，因为它对检测结果的可靠性、准确性和安全性起到至关重要的作用。本文主要从临床基因扩增检验实验索的平血布局，空调通风系统设计、气流控制和污染的防制几个方面对实验室设计屮的主要特点进行了阐述。临床基因扩增检验实验室设计的核心问题是如何避免污染。因此，实验室的平面布局、空调通风系统设计、气流控制等都是围绕这个核心问题进行的。下面就对这几个方面分别进说明。2PCR实验室平面布局临床基因扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区、标木制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。为避免交叉

4、污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂贮存和准备区T标本制备区-扩增反应混合物配制和扩增区T扩增产物分析区。各实验区Z间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。PCR实验室平面布置示意图如图1所示。艸J分析区扩增反应观杯木制备区试刑倨"爪力:+和汕的区/质力8—/K力:+—AIKJjt■<1<1<1图1PCR实验室平而布置示意图3实验室空调通风系统设计及压力控制PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为避免各个实验区域间交义污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式。同时，要严格控制送、排风的比例

5、以保证各实验区的压力要求。3.1试剂贮存和准备区该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区，不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内，并在木区内制备成所需的贮存试剂。对与气流压力的控制，木区并没冇严格的要求。3.2标本制备区该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。木区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入木区的气溶胶污染。另外，由于在加样操

6、作中可能会发牛气溶胶所致的污染，所以应避免在本区内不必要的走动。3.3扩增反应混合物配制和扩增区该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外，已制备的DNA模板和合成的cDNA（来自样本制备区）的加入和主反应混合液（来白试剂贮存和制备区）制备成反应混合液等也可在木区内进行。在巢式PCR测定中，通常在第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增有较高的污染危险性，第二次加样必须在本区内进行。本区的压力梯度耍求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染，应尽虽减少在木区内的不必要的走动

7、。个别操作如加样等应在超净台内进行。3.4扩增产物分析区该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。如使用全自动封闭分析仪器检测，此区域可不设。木区是最主要的扩增产物污染來源，因此对木区的压力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从木区扩散至其它区域。4污染的预防与控制PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中，常见的冇以下儿种污染类型：扩增产物的污染；天然基因组DNA的污染：试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发生污染，实验就必须停止，直到找到污染源为止，而且实验结果必须作废，需重新进行实验

8、。所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而口繁琐，浪费人力物力。因此耍避免污染，首先应是预防，而不是排除。4.1工作区域的严格划分（1）各个实验区域设置合理；（2）各个实验区域要有明显的标记（如醒目的门牌或不同的地血颜色等），以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发牛混淆。4.2合理的系统设置（1）合理的空调通风系统设置，尽屋采用全送全排的空调系统；（2）严格的气流压力控制，保