兽医微生物学实验

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1、兽医微生物学实验实验一显微镜的构造和使用及细菌形态结构的观察进入实验室的注意事项1。穿工作服2。书本等物品放入抽屉3。树立无菌观念4。不能抽烟、吃零食5。爱护公物，注意节约一、目的要求1。了解显微镜的简单构造和原理2。学习掌握油镜的使用技术3。观察细菌的基本形态二、普通光学显微镜的简单原理1。支持部分：镜臂、镜台、镜筒、粗细调节器2。放大部分：接目镜、接物镜3。照明部分：反光镜、聚光器、滤光镜三、几种显微镜的简单原理1。暗视野2。相差3。荧光4。电子四、油镜的识别及使用原理五、使用完毕显微镜及标本片的处理作业1。普通显微镜与油镜使用上有何区别？2。绘出你所观察到的细菌形态3。你最喜

2、欢哪个细菌，为什么？枯草杆菌，革兰氏染色，G+枯草杆菌，芽胞简易染色金黄色葡萄球菌，革兰氏染色，G+大肠杆菌，革兰氏染色,G-破伤风梭菌，芽胞染色实验二细菌的抹片制备及染色一、目的要求1。掌握细菌抹片的制备方法2。掌握几种常用的染色方法和技术及无菌操作技术3。巩固显微镜的使用，了解细菌的染色特性、形态二、材料大肠杆菌：斜面，肉汤金黄色葡萄球菌：斜面，肉汤枯草杆菌：斜面三、制片及染色步骤取干净玻片-抹片-干燥-固定-染色-干燥镜检四、常用的几种染色方法（一）革兰氏染色法1。草酸铵结晶紫染色1-2’，水洗2。革兰氏碘液媒染1-2’，水洗3。95%酒精脱色约30’’-1’，水洗4。沙黄水

3、溶液复染10’’-30’’，水洗5。吸干，镜检（二）姬姆萨染色法1。甲醇固定3’，时间长短均可2。姬姆萨液足量30’或数小时至24h，水洗3。吸干镜检（三）瑞氏染色法抹片干燥无需固定，直接滴加染色1-3’，再加等量中性蒸馏水，轻轻混匀，续染15’，水洗，吸干镜检（四）美兰染色法1。固定好抹片加上足量染液2-3’2。吸干镜检作业1。说说你的实验结果2。根据实验体会，你认为制备染色标本时应注意哪些事项？3。作革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？其染色成败关键一步是什么？实验三培养基的制备一、目的要求1。掌握基础培养基制备的原则和要求2。掌握一般培养基的制备过程及pH测定二、实验材料（略）

4、三、制作的一般要求须含有细菌生长所需的营养物质盛器需无菌，且不含抑菌生长的物质pH应符合细菌生长的要求，一般在7.2~7.6要过滤，应为透明或半透明状，以便观察细菌生长变化制好后需高压灭菌四、步骤称取→溶解→调pH过滤→分灭菌→菌检普通肉汤的制备蛋白胨10g，牛肉膏5g，NaCl5gK2HPO41g，蒸馏水1000ml分别称取以上物品，置铝锅内加热溶解。取5ml肉汤于试管内用0.1mol/LNaOH校pH至7.4-7.6，根据其用量计算所配培养基需用的1mol/LNaOH用量，用滤纸过滤，分装至短试管所需1NNaOH的量培养基量×校正时所需0.1mol/LNaOH量5×10普通琼脂

5、培养基的制备取已配好的肉汤500mL于铝锅内，加入琼脂10g，加热溶解，用纱布、棉花过滤、分装灭菌：将分装好的培养基扎口后置高压灭菌锅内121℃（15磅）20-30分钟菌检：抽取样品，置37℃24h作业制作培养基时应注意哪几点？为什么肉汤培养基在高压灭菌前pH要略调高一些？为什么校正pH时，调校少量培养基用0.1mol/LNaOH，而调校大量培养基时用1mol/LNaOH？说说你们组的产量和品质实验四细菌分离培养及移植一、目的掌握细菌分离培养的基本要领和常用方法使被检材料适当稀释，以求获得独立单在菌落二、需氧分离培养法平板分离培养法芽胞需氧分离培养法化学药品分离培养法实验动物分离培

6、养法三、实验内容平板划线肉汤培养斜面移植接种完毕标明细菌、日期、姓名，置37℃培养24h四、作业何谓纯培养？分离培养的目的何在？在挑取固体培养物上的细菌作平板划线时，为什么每次都要将接种环上剩余的细菌烧掉？为什么要把培养皿倒置培养？实验五药敏试验一、目的要求学会药敏试验的操作方法及观察抑菌圈的范围二、试验材料菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌药敏纸片：卡那霉素，阿米卡星，红霉素，复方新诺明，呋喃妥因，庆大霉素，链霉素镊子、酒精灯等三、操作步骤1.每人取平板接种细菌，致密划线2.以无菌镊子将各种药敏纸片分别是贴于培养基表面3.倒置，37℃培养24h，观察结果四、结果判定根据药敏纸片周围有

7、无抑菌圈及其大小，来判断该菌对各种药物的敏感程度，分为：高度敏感、中度敏感、低度敏感、不敏感五、作业1.什么叫细菌对抗菌药物的敏感度？了解它有何实际意义？2.写出你所做的药敏试验结果。实验六细菌的生化试验一、目的要求1。了解细菌生化试验在细菌学诊断上的重要意义2。掌握几种生化试验的方法二、实验材料大肠杆菌产气杆菌变形杆菌兔沙门氏菌三、实验内容及操作1。糖或醇发酵试验2。靛基质（吲哚）试验3。甲基红（MR）试验4。VP二氏试验5。枸椽酸盐利用试验6。硫化氢试验7。尿素试