富硒灵芝液体深层培养及营养成分分析

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1、江南大学硕士学位论文富硒灵芝液体深层培养及营养成分分析姓名：陈虎中请学位级别：硕士专业：食品科学指导教师：张连富20080601摘要灵芝是我国珍贵的药用真菌，硒是人体必需的微量元素。以灵芝菌丝体作为载体，利用活化硒矿水作为硒源，进行生物富硒的研究在国内外鲜有报道。因此，本研究对于探索新的生物富硒途径、提供新的有机硒资源具有重要意义。本研究的主要实验内容及研究结论如下，首先，通过快速登髙法和响应面分析法得出活化硒矿水为唯一硒源条件下灵芝深层培养的最佳培养基组成：葡萄糖2.13%.荻皮汁3.96%.KH2PO40.3%和MgSO4-7H2O0.09%o在优化条件下，得到的菌丝体生物量

2、在18g・L“左右，菌丝体中总硒含量在】50昭・『以上，富硒率达到55%。其次，通过正交试验优化了活化天然硒矿粉制备含硒水溶液的工艺条件：边搅拌边将300g硒矿粉添加到600mL0.6mol・L“氨水中氨解72h,然后加热至近干并重新补充氨水氨解两次，再用pH8.0的磷酸缓冲液进行磷酸化处理后，超声波提取0.5h；在优化条件下硒矿水中硒浓度可以达到50Ag・mLX混合硒源（活化硒矿水+亚硒酸钠）试验结果表明，当培养基中添加15yg・ml/的硒（5ng・mL"来自于硒矿水、10pg・ml/来自亚硒酸钠）时，菌丝体生物量稳定在18g-L'1左右，总硒含量可提高到260pg・g"左右，

3、富硒率在30%以上。再次，在摇瓶实验的基础上进行了5L发酵罐扩大培养并对发酵罐参数进行了优化。通过单因素试验、正交试验和发酵罐在线控制方法，优化得到灵芝在发酵罐中生长的最优条件为：培养温度280通气量初始pH6.5,搅拌速度120rmd,接种量10%,分阶段pH控制值5.0,DO值（与转速串联）6%,此种条件下菌丝体生物量可达到14・91g・L“，总硒含量354憾『，富硒率35.2%。最后，测定了所培养灵芝中的营养素含量并分析了硒的存在状态。富硒灵芝菌丝体中蛋白质含量为16.28%,远高于普通灵芝的12.31%；原子吸收测定结果表明富硒灵芝中Ca.Fe、Zn、Se的含址分别为39

4、&lpgg化33&7ggg45.6ggg,和318・5pg・『；总硒中有机硒的比例达到79.1%o对硒矿水和亚硒酸钠原料成本进行计算，得出利用活化硒矿水取代亚硒酸钠作为硒原具有节约成本的作用。关键词：灵芝，活化硒矿水，深层培养，富硒AbstractGanodermaLucidum(GL)isoneofthemostpreciousChinesemedicinalFungi•Seleniumisanessentialtraceelementforhumanbeing.Thereareveryfewreportsaboutthestudiesonthebio-transformof

5、seleniumusingGLasbiologicalcarrierandactivatedseleniumoresolution(ASOS)asseleniumsourceallovertheworld.Therefore,theresearchinthispaperhasimportantsignificanceinprobingnewwaysofseleniumaccumulationandinprovidingnewresourcesoforganicselenium.Themainresearchcontentsandtheresultsgottenareasfollo

6、ws^Firstly,thecomponentsofculturemediumwereoptimizedbythesteepestascentpathexperimentsandResponseSurfaceMethod(RSM)whenusingASOSonlyasseleniumresource:glucose2.13%,branjuice3.96%>KH2PO4O.3%,MgS04*7H200.09%・Undertheoptimizedcultivationconditions^thebiomassreached18g-L'thetotalseleniumcontente

7、xceeded150pg-g-1andtheseleniumaccumulationratecouldreach55%.Secondly,theprocessingtechnologyofASOSwasstudiedbyorthogonalexperimentalmethodologyasfollows:Adding300gpowderofseleniummineto600mLrotatedNH3-H2Oof0>6mobL4andlastedfor72h,thendriedito