人视网膜色素上皮细胞中调节葡萄糖转运蛋白基因表达变化的研究

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1、分类号：Ｒ９４５单位代码：１０１８３研究生学号：２０１５７７Ｅ００８密级：公开吉林大学硕士学位论文专业学位（）人视网膜色素上皮细胞中调节葡萄糖转运蛋白基因表达变化的研究ＳｔｕｄｏｎｔｈｅＲｅｕｌａｔｉｏｎｏｆＧｌｕｃｏｓｅＴｒａｎｓｏｒｔｅｒｙｇｐＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＨｕｍａｎＲｅｔｉｎａｌＰｉｇｍｅｎｔＥｐｉｔｈｅｌｉａｌＣｅｌｌｓ作者姓名：潘燕？类别：工程硕士领域（方向）：制药工程指导教师：韩冰副教授培养单位：药学院２０１８年６月—————————————————————人视网膜色素上

2、皮细胞中调节葡萄糖转运蛋白基因表达变化的研究—————————————————————StudyontheRegulationofGlucoseTransporterGeneExpressioninHumanRetinalPigmentEpithelialCells作者姓名：潘燕领域（方向）：制药工程指导教师：韩冰副教授类别：工程硕士答辩日期：2018年6月3日未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否

3、则应承担侵权的法律责任。，吉林大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文储鮮：曰期：年／月々曰摘要人视网膜色素上皮细胞中调节葡萄糖转运蛋白基因表达变化的研究目的：调节人视网膜色素上皮细胞中葡萄糖转运蛋白的基因表达，探讨下调葡萄糖转运蛋白相关基因表达的可能。方法：采用基因编辑系统对人源视

4、网膜ARPE-19宿主细胞进行相应的基因编辑，运用CrisprCas9基因编辑系统对细胞中的葡萄糖转运蛋白基因进行敲除，并且对细胞中的目标基因葡萄糖转运蛋白的基因编辑效率进行验证，考察基因编辑系统在人视网膜色素上皮中的编辑效果。结果：实现了葡萄糖转运蛋白相关基因的敲除，完成了人源视网膜色素上皮细胞ARPE-19基因缺陷型单克隆细胞株的构建。结论：利用CrisprCas9技术对视网膜细胞的内源性基因进行编辑，有可能作为基因治疗糖尿病性视网膜病变的新策略。我们证实了设计的针对葡萄糖转运蛋白的sgRNA可以准确靶向并定点切割目标基因，并且这种治疗策略在细胞学方面是安全有效的。使用sgRNA对

5、内源葡萄糖转运蛋白基因进行了敲除是具有治疗意义的，从根本上解决了糖尿病性视网膜病变眼内葡萄糖蓄积而产生的各种细胞损害，是一种潜在的治疗糖尿病性视网膜病变的手段。关键词：糖尿病性视网膜病变，葡萄糖转运蛋白，基因表达IABSTRACTStudyontheRegulationofGlucoseTransporterGeneExpressioninHumanRetinalPigmentEpithelialCellsObjective:Toregulatethegeneexpressionofglucosetransporterinhumanretinalpigmentepithelialcel

6、ls.Thetreatmentofdiabeticretinopathywasstudied.Method:AdoptingtheCrisprCas9systemofanthropogenicretinalARPE-19hostcellscorrespondingknockout,usingCas9knockoutwaystoglucosetransporterproteingeneinthecells.Results:Thehumanretinalarpe-19monoclonalcelllinewhichisglucosetransportergeneknockoutwasbuil

7、t.Theconstructedcelllinewasverifiedbysequencing.Conclusion:WereportanewstrategyofusingCrisprCas9toeditendogenousgenesandpossiblyasagenetherapyfordiabeticretinopathy.WeconfirmedthatthedesignofsgRNAforglucosetransporterscanacc